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組織來源 |
結(jié)腸組織 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細胞分類 |
大鼠原代細胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
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生長特性 |
貼壁培養(yǎng) |
細胞形態(tài) |
鋪路石狀細胞 |
細胞簡介：
結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第 3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母M，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。結(jié)腸黏膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下導(dǎo)致結(jié)腸癌，是常見的惡性腫瘤之一。因此，體外培養(yǎng)結(jié)腸黏膜上皮細胞為研究進一步結(jié)腸癌等提供了前提和基礎(chǔ)。
細胞特性：
1）組織來源于實驗動物的正常結(jié)腸組織。
2)細胞鑒定：細胞角蛋白-18（CK-18）熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式：鋪路石狀細胞，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基：
我們推薦使用 Delf 原代上皮 細胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。
(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng)，是建立細胞系的步，是一項基本技術(shù)。原代細胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
原代細胞的分離方法：
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養(yǎng)后，細胞容易貼壁生長。
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