(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項(xiàng)基本技術(shù)。原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
商品屬性：
|
組織來源 |
脊髓 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|
細(xì)胞分類 |
大鼠原代細(xì)胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
|
生長特性 |
貼壁 |
細(xì)胞形態(tài) |
內(nèi)皮細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡介：
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞分離自脊髓組織；脊髓是細(xì)細(xì)的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu)，位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護(hù)；是源自腦的神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。神經(jīng)系統(tǒng)的細(xì)胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息。人和脊椎動物神經(jīng)系統(tǒng)的一部分，在椎管里面，上端連接延髓，兩旁發(fā)出成對的神經(jīng)，分布到四肢、體壁和內(nèi)臟。脊髓的內(nèi)部有一個H形（蝴蝶型）灰質(zhì)區(qū)，主要由神經(jīng)細(xì)胞構(gòu)成；在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū)，主要由有髓神經(jīng)纖維組成；脊髓是許多簡單反射的。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)（稱為脊神經(jīng)）分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官。微血管又稱。分布于各種組織和細(xì)胞間的微細(xì)的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7～9微米，數(shù)量極多，成網(wǎng)狀分布。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織，其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等。細(xì)的由一個內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔，較粗的由2～3個內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)；分布于腺、腎臟等處的，除有縫隙連接外，細(xì)胞本身有許多小孔，（孔徑800～1000埃），稱有孔；分布于肝、脾、骨髓及某些腺的，管腔擴(kuò)大，稱血竇。的管壁薄、通透性大、管徑細(xì)（8～10微米）、數(shù)量多、血流速度慢，這些特點(diǎn)使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場所，又稱交換血管。血竇（sinusoid）由管腔擴(kuò)大而成，竇壁的一般結(jié)構(gòu)與壁相同，由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙；肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的，有較寬的細(xì)胞隙（0.1～0.5微米）；肝、脾血竇的基膜不完整或無基膜，通透性比大，較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞，脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞，這兩種細(xì)胞都有吞噬能力，可吞噬血液中的異物、等有害物質(zhì)，是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些腺的血竇有連續(xù)的基膜。
方法簡介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞采用中性蛋白酶 - 膠原酶聯(lián)合消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等：
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
PLELISAKit
大鼠雌酮(E1)elisa分析檢測試劑盒
E1 ELISA kit
人堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)elisa分析檢測試劑盒
HumanbFGFELISAKit
大鼠內(nèi)皮抑素（ES）elisa檢測試劑盒
EDTA二鉀血液抗凝液
土壤酸性蛋白酶(S-ACPT)測試盒
通用型甜菜壞死黃脈病毒（Beet Necrotic Yellow Vein Virus； BNYVV）基因檢測試劑盒
植物維生素D(VD)elisa分析檢測試劑盒
VD ELISA Kit
人催產(chǎn)素(OT)elisa分析檢測試劑盒
OTELISAKit
大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)elisa檢測試劑盒
載玻片細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒
小鼠Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)elisa檢測試劑盒
動物糖解法O-糖基分解試劑盒
NMDA受體調(diào)節(jié)1樣蛋白抗體
NARG1L
FLJ45825蛋白抗體
FLJ45825
BTRC2蛋白抗體 Anti-BTRC2/beta TRCP2
磷酸化P73腫瘤抑制基因抗體 Anti-Phospho-p73(Tyr99)
嗅球蛋白1抗體 Anti-OLFM1/Noelin
突觸結(jié)合蛋白相關(guān)基因2抗體 Anti-synaptotagmin-2
APC標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈
大鼠脊髓微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠白介素6（IL－6）elisa檢測試劑盒
小鼠腦脊髓炎病毒(EV)抗體(IgG)elisa檢測試劑盒
人8異前列腺素F2α(8-iso-PGF2a)elisa分析檢測試劑盒
（PROTEASE）活性比色法定量檢測試劑盒
原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。二、實(shí)體組織材料的分離方法
對于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機(jī)械分散法
特點(diǎn):簡便、快速,但對組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。