(1)原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法
原代細(xì)胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細(xì)胞在體外進(jìn)行的培養(yǎng)，是建立細(xì)胞系的步，是一項(xiàng)基本技術(shù)。原代細(xì)胞接近和能反映體內(nèi)生長特性，適宜用于敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
商品屬性：
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組織來源 |
冠狀動(dòng)脈 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
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細(xì)胞分類 |
大鼠原代細(xì)胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相：空氣，95%；CO2，5% |
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生長特性 |
貼壁 |
細(xì)胞形態(tài) |
成纖維細(xì)胞樣 |
細(xì)胞簡介：
大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞分離自冠狀動(dòng)脈組織；冠狀動(dòng)脈是供給心臟血液的動(dòng)脈，起于主動(dòng)脈根部，分左右兩支，行于心臟表面。采用Schlesinger等的分類原則，將冠狀動(dòng)脈的分布分為三型：右優(yōu)勢(shì)型、均衡型、左優(yōu)勢(shì)型。左右冠狀動(dòng)脈是升主動(dòng)脈的對(duì)分支。左冠狀動(dòng)脈為一短干，發(fā)自左主動(dòng)脈竇，經(jīng)肺動(dòng)脈起始部和左心耳之間，沿冠狀溝向左前方行后，立即分為前室間支和旋支。前室間支沿前室間溝下行，旋支繞過心尖切跡至心的膈面與右冠狀動(dòng)脈的后室間支相吻合。它是構(gòu)成冠狀動(dòng)脈壁的主要細(xì)胞成分，細(xì)胞膜上分布著多種離子通道，如電壓依賴性Na+通道、多種Ca2+通道和K+通道；它們參與了靜息電位的維持與細(xì)胞膜電位的復(fù)極化、超極化，調(diào)節(jié)血管平滑肌的收縮及舒張功能，此外動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展也涉及冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖、炎癥及凋亡等。因此，原代分離培養(yǎng)的冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞，對(duì)研究生理和病理狀態(tài)下離子通道及血管張力變化機(jī)制具有非常重要的作用。冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
公司正在出售的產(chǎn)品：
NT-3ELISAkit
大鼠丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)elisa分析檢測(cè)試劑盒
ALT ELISA Kit
人激肽釋放酶1(KLK 1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
KLK1ELISAKit
大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)elisa分析檢測(cè)試劑盒
CCK-8(水溶性四氮唑－8) 比色法細(xì)胞繁殖測(cè)定試劑盒
山羊肝脂酶(HL)elisa檢測(cè)試劑盒
動(dòng)物源性食品羊源基因檢測(cè)試劑盒
魚生長(GH)elisa分析檢測(cè)試劑盒
GH ELISA Kit
人巢蛋白1(NID1)elisa分析檢測(cè)試劑盒
NID1ELISAKit
人肝X受體β(LXRβ)elisa檢測(cè)試劑盒
植物種子葉綠體粗提分離試劑盒
可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（S-AI）測(cè)試盒
大鼠糖原合酶激酶3β(GSK3β)elisa檢測(cè)試劑盒
NDUFAF7蛋白抗體
NDUFAF7
6號(hào)染色體開放閱讀框186抗體
C6orf186
味覺感受器蛋白T2R38抗體 Anti-T2R38/TAS2R38
p21活化蛋白激酶ARHG7抗體 Anti-PAK3/ARHG7
KLHDC9蛋白抗體 Anti-KLHDC9
轉(zhuǎn)綠調(diào)節(jié)因子SLTM抗體 Anti-SLTM
PE-Cy7標(biāo)記的兔抗人IgG H&L
大鼠冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞酪蛋白激酶Ⅱβ亞基抗體
LY6G5B/C6orf19
CULLIN抗體
C10orf46
原代細(xì)胞的分離方法：
一、懸浮細(xì)胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。二、實(shí)體組織材料的分離方法
對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法（物理裂解）和消化分離法。
（一）機(jī)械分散法
特點(diǎn):簡便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
（二）消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊（或糊狀），應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長。