

組織來源 |
骨骼肌 |
規(guī)格 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 |
細胞分類 |
大鼠原代細胞 |
培養(yǎng)條件 |
氣相:空氣,95%;CO2,5% |
生長特性 |
貼壁 |
細胞形態(tài) |
內皮細胞樣 |
細胞簡介:

大鼠骨骼肌微血管內皮細胞分離自四肢肌肉組織;骨骼肌又稱橫紋肌,肌肉中的一種,約占全身重量的40%。骨骼肌纖維為長柱形的多核細胞,肌膜的外面有基膜緊密貼附。屬于橫紋肌,橫紋肌還包括心肌與內臟橫紋肌,其中骨骼肌主要分布于四肢。每塊肌肉都是具有一定形態(tài)、結構和功能的器官,有豐富的血管、分布,在軀體神經支配下收縮或舒張,進行隨意運動。微血管又稱。分布于各種組織和細胞間的微細的血管。介于微動脈和微靜脈之間。平均直徑7-9微米,數(shù)量極多,成網狀分布。管壁由一層內皮細胞及一薄層基膜組成,厚約0.5微米?;ね饷嬗斜咏Y締組織,其中有纖維細胞、巨噬細胞和周細胞等。細的微血管由一個內皮細胞圍成管腔,較粗的微血管由2-3個內皮細胞圍成。分布于肌肉組織、神經組織和結締組織中的微血管,內皮細胞間為縫隙連接(縫隙寬150埃),稱連續(xù)微血管。血管內皮細胞在器官和組織的結構和功能上起著非常重要的作用。并與多種的發(fā)生與發(fā)展有關。近年來血管內皮細胞在炎癥、休克等一系列病理生理改變中的重要性愈來愈受到人們的重視。研究發(fā)現(xiàn),不同來源的內皮細胞在生物學特征、結構和功能等方面均存在一定差別,而同是微血管內皮細胞,它們又存在器官和組織的特異性。骨骼肌組織是動物體內含量多的組織,肌肉組織供血豐富,是研究內皮細胞功能和血管生成的理想靶組織。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠骨骼肌微血管內皮細胞采用膠原酶消化結合差速貼壁法、培養(yǎng)基篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測
實驗室分離的大鼠骨骼肌微血管內皮細胞經CD31熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml),明膠(0.1%)
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):內皮細胞樣
傳代特性:可傳2-3代
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠骨骼肌微血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng),是建立細胞系的步,是一項基本技術。原代細胞接近和能反映體內生長特性,適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用。
原代細胞的分離方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料,由于細胞間結合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大,而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀),應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動,使團塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時再采用機械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。
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