商品屬性:
貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
A-PJ1121-1000U |
1000U |
Dnase I(Rnase free) |
儲(chǔ)存條件:
Dnase I(Rnase free)儲(chǔ)存:-20°C 可保存 2 年。
產(chǎn)品介紹:
該酶是將單鏈或雙鏈 DNA 同等程度的隨機(jī)分解,**具有 5′-P 末端寡核苷酸的脫氧核糖核酸內(nèi)切酶。由于RNase-free DNase I 中 Protease 已幾乎被完全去除,從而提高了該酶在 pH 中性區(qū)域的穩(wěn)定性。此外該酶中添加了
Rnase Inhibitor,用于抑制 RNA 樣品中殘留的 RNase 核酸酶,因此可以有效抑制 RNA 提取過(guò)程中 Rnase 酶對(duì) RNA的降解。Stop Buffer 終止反應(yīng)后,可通過(guò)一步加熱失活DNase I 活性。
活性定義:
在 50 μl 體系下,37℃ 10min 條件下完全消化 1 μg pBR322質(zhì)粒 DNA 所需的酶量定義為 1 個(gè)活性單位。純度
2 U 的本酶和 1 μg 的 16S, 23S rRNA 在 37℃、pH7.5 的條件下反應(yīng) 1 小時(shí),RNA 的電泳譜帶不發(fā)生變化
應(yīng)用:去除 RNA 樣品中的 DNA 污染。
操作方法:
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系
RNA 1~50 μg
10× RD Buffer 2 μl
Rnase Free DNase I (2 U/μl) 1 μl*
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*若 RNA 樣品中含有超過(guò) 5 μg 基因組 DNA 污染,請(qǐng)使用2 μl 該酶。
2. 37°C 孵育 15min 以消化去除基因組 DNA。
3. 孵育完畢后加入 2 μl 10× RD Stop Buffer,混合均勻室溫放置 1min,并置于 75°C 10min 加熱失活 DNase I。樣品可直接用于下一步反轉(zhuǎn)錄等試驗(yàn)。
注意:
1)通常加熱方法即可失活 DNase I。如需要去除殘留的變性蛋白,可在 37°C 消化完畢后使用酚氯仿抽提并沉淀 RNA樣品(不進(jìn)行加熱操作)。
2)10× RD Stop Buffer 中含有螯合劑用于去除二價(jià)陽(yáng)離子,進(jìn)行加熱失活前,必須加入 2 μl 10× RD Stop Buffer 并混合均勻,再進(jìn)行熱失活,否則會(huì)導(dǎo)致 RNA 降解。
3)處理完畢的 RNA 樣品進(jìn)行一步反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí),添加量需要<20%(如 20 μl 的反轉(zhuǎn)錄體系中加入量要<4 μl)
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