商品屬性:
貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
A-PJ1105-50 ml |
50 ml |
Super ECL Substrate |
A-PJ1105-500ml |
500ml |
Super ECL Substrate |
儲(chǔ)存條件:
Super ECL Substrate儲(chǔ)存:2-8°C,Super ECL A 要求避光保存。
產(chǎn)品介紹:
超敏 ECL 顯色液用于 Western、Northern 和 Southernblot 分子雜交的化學(xué)發(fā)光檢測(cè),比傳統(tǒng)化學(xué)顯色法靈敏度高,可達(dá) pg 水平。原理是采用新型發(fā)光底物(Luminol),其與辣根過氧化物酶反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生很強(qiáng)的發(fā)光信號(hào),在暗室中對(duì)X-光片感光,以此檢測(cè)微量蛋白而獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。?;鰪?qiáng)型 ECL 顯色液具有靈敏度高,持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等特點(diǎn)。
應(yīng)用:
在 Western 印跡分析,核酸雜交以及 EMSA 實(shí)驗(yàn)中,HRP標(biāo)記的二抗或探針與靶分子結(jié)合再與底物反應(yīng)產(chǎn)生可見光。
操作方法:
1.按每平方厘米膜面積用 0.1-0.2 ml 配置顯色液:根據(jù)顯色液的需要量,取等體積 A 液和 B 液,混勻后避光保存?zhèn)溆?;該顯色液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。
2.2. 取出膜,平放在干凈的保鮮膜上,膜的正面(蛋白質(zhì)面)朝上,在膜的中央加適量的配置好的顯色液(6×8 cm 的膜加 2 ml 顯色液),溶液向四周迅速擴(kuò)散,覆蓋所有膜面。室溫保溫 5 分鐘左右,在此過程中請(qǐng)仔細(xì)觀察信號(hào)的出現(xiàn)。注意:如果信號(hào)強(qiáng),在暗室中能很快看到陽性信號(hào)出現(xiàn)。
3.3. 待信號(hào)出現(xiàn)且穩(wěn)定后,用鑷子夾起膜,除去多余的顯色液,平放在干凈的保鮮膜上,膜的正面(蛋白質(zhì)面)朝上,在轉(zhuǎn)移膜的上面再覆蓋一層保鮮膜,除去保鮮膜與轉(zhuǎn)移膜之間的空氣泡,請(qǐng)務(wù)必保證保鮮膜是干凈的,不被其他雜物或液體污染。
4.4. 在暗室中,將膜的正面對(duì)著 X-光片,放入暗盒。**次曝光時(shí)間在 1 分鐘左右(有經(jīng)驗(yàn)的操作者可以根據(jù)信號(hào)的強(qiáng)弱自行決定),立即按要求對(duì) X-光片進(jìn)行顯影和定影,確定*佳曝光時(shí)間。曝光時(shí)間從數(shù)秒到數(shù)小時(shí)不等;特別弱的過夜曝光也可。
注意
1.PVDF 膜較硝酸纖維膜能更好的結(jié)合蛋白,因此呈現(xiàn)較強(qiáng)的信號(hào)。選高質(zhì)量的 PVDF 膜;盡可能不用 Nylon 膜。
2.2.與抗體結(jié)合以后,要保證膜處于濕潤(rùn)狀態(tài),否則會(huì)導(dǎo)致背景較高。
3.3.沒有信號(hào)的原因:有些抗體不識(shí)別變性抗原,有時(shí)需要考慮電泳過程對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的影響;樣品中無待測(cè)蛋白質(zhì)或含量過低;一抗效價(jià)低,用量少,可適當(dāng)增加一抗的用量;
4.4.背景過高原因:轉(zhuǎn)移膜封閉不充分;與抗體孵育后洗滌不徹底;膜在處理過程中過干;二抗用量過多等。
5.5.注意及時(shí)更換顯影液、定影液。
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