商品屬性：

儲存條件：

RTS BL21(DE3)Chaprone助溶表達(dá)感受態(tài)RTS 系列感受態(tài)為干粉形式，均可室溫保存 3 天，長期保存-20°C（2 年）。經(jīng) Nano E.coli Transfection Reagent溶解后的感受態(tài)必須分裝后，并于-60°C 以下保存。溶解后的感受態(tài)細(xì)胞避免反復(fù)凍融，在-60°C 以下可保存 6 個月。

產(chǎn)品介紹：

BL21(DE3) Chaprone 感受態(tài)細(xì)胞中含有分子伴侶蛋 白質(zhì)粒，其表達(dá)產(chǎn)物可協(xié)助重組蛋白正確折疊形成可溶活性 蛋白。分子伴侶蛋白質(zhì)粒為氯霉素抗性（chloramphenicol， Cmr）的表達(dá)受控于四環(huán)素（tetR）操縱子，因此該感受態(tài) 不適用于氯霉素抗性表達(dá)質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化。 本品使用 獨(dú)有的化學(xué)感受態(tài)**技術(shù)制備， 其室溫可保存 3 天、-20°C 可保存 2 年（推薦保存溫度）、 -80°C 可長期保存性能無下降。運(yùn)輸過程中無需干冰，可常 規(guī)冰袋運(yùn)輸（推薦運(yùn)輸溫度）。該感受態(tài)細(xì)胞為熱激感受態(tài) 細(xì)胞，轉(zhuǎn)用于蛋白表達(dá)（不可用于克隆和載體構(gòu)建），經(jīng) 42°C 熱激 1min 可獲得 105～106 cfu/μg 效價，可滿足質(zhì)粒轉(zhuǎn)化要 求。該制品使用簡單、運(yùn)輸、儲存方便。 
組分
RTS BL21(DE3)Chaprone Competent Cell（10T） 1 瓶
Nano E.coli Transfection Reagent 1 mL

操作方法：

1. 從-20°C 冰箱中取出 Nano E.coli Transfection Reagent徹底融化，放置于冰上。取 300 μl Nano E.coli TransfectionReagent 加入到一支凍干感受態(tài)細(xì)胞中，并分裝到 10 支 1.5ml EP 管中（每支 30 μl），于-60°C 以下保存（或立即使用）。
2. 將 10～100 ng 質(zhì)粒 DNA（不可使用連接產(chǎn)物、不可使用氯霉素篩選標(biāo)記質(zhì)粒）加入到分裝的感受態(tài)細(xì)胞中，輕彈EP 管（或槍頭輕輕吹打），置于冰上 15min。
3. 置于 42°C 熱激 1 min 后，迅速置于冰上急冷 2 min。
4. 熱激完畢后，向上述感受態(tài)細(xì)胞中加入 450 μL 不含***的 SOC（或 LB）培養(yǎng)基，37 °C 振蕩（225 rpm）培養(yǎng)60 min。使質(zhì)粒上抗性標(biāo)記基因表達(dá)，菌體復(fù)蘇。
5. 取200 μl復(fù)蘇菌液涂布到含相應(yīng)***的LB瓊脂平板表面。（含相應(yīng)質(zhì)粒***和 20 μg/ml 氯霉素）
6. 將平板置于 37 °C 培養(yǎng)，12~18 小時后可出現(xiàn)菌落。
7. 挑選生長良好的菌落，接入 LB 培養(yǎng)基（含相應(yīng)質(zhì)粒***，20 μg/ml 氯霉素），37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜。
8. 1/50 比例接入新的 LB 培養(yǎng)基（含相應(yīng)質(zhì)粒***，20μg/ml 氯霉素，0.5 mg/ml L-阿拉伯糖）37 ℃劇烈振蕩培養(yǎng)至菌體密度 OD600 約 0.3（約 2h）。
9. 加入終濃度 2 ng/ml 四環(huán)素（誘導(dǎo) chaprone 伴侶蛋白表達(dá)），37℃劇烈振蕩培養(yǎng)至 OD600 約 0.5（約 2~4h）。
10. 加入適量 IPTG(0.1-1 mM), 15℃振蕩培養(yǎng) 24h（培養(yǎng)搖床無法制冷條件下，室溫誘導(dǎo) 8～12h）。
11. 4,000 rpm 室溫離心 15 min，收集細(xì)胞，進(jìn)行蛋白表達(dá)和可溶性表達(dá)分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

注意事項(xiàng)：

1.操作容易：將組織剪成適當(dāng)大小，浸沒在RNAfixer 中即可使其RNA 不被降解。
2.無需液氮：使樣品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其適用于臨床和野外樣品的快速和大規(guī)模采集。
3.方便運(yùn)輸：處理過的樣品能在25℃保存一周,使樣品郵寄和運(yùn)輸變得容易和便宜,有利學(xué)術(shù)合作和交流。
4.多次凍融: 經(jīng)RNAfixer 處理的樣品可反復(fù)凍融多次, 其間可對樣品進(jìn)行各種處理而不影響*終提取的RNA 的質(zhì)量。
5.可比性強(qiáng): RNAfixer 能減少大規(guī)模樣品處理中的誤差,增加各次實(shí)驗(yàn)數(shù)間的可比性, 對大規(guī)?；虮磉_(dá)譜的分析尤其有用。

操作步驟：

RNAfixer 只用于新鮮組織，浸泡入 RNAfixer 前禁止冷凍組織。只需要迅速將新鮮組織剪成長、寬，高任意一邊厚度<0.5 厘米浸泡入 RNAfixer 即可（只要有一邊厚度不超過 0.5 厘米，RNAfixer 可以迅速滲透，其它兩邊的尺寸并不重要）。將新鮮組織浸泡 在 5 倍體積的 RNAfixer 中，按照指示存放在適當(dāng)?shù)臏囟取?/span>
1.動物組織 RNAfixer 并不破壞或者溶解組織結(jié)構(gòu)，因此浸泡在 RNAfixer 中達(dá)到滲透平衡的組織 可以從 RNAfixer 中取出，然后切成更小的塊，然后放回到 RNAfixer 中下次繼續(xù)使用。小器官如小鼠肝、腎、脾不需要剪切,可以完整的存放在 RNAfixer 中。

2.植物組織很多植物組織直接浸泡入 RNAfixer 即可，有的植物有天然滲透屏障如臘質(zhì)保護(hù)層，需要先破壞掉臘質(zhì)層,便于 RNAfixer 滲透。
3.組織培養(yǎng)細(xì)胞細(xì)胞吹打下來后,離心收集細(xì)胞,棄上清，用冰浴的 PBS 緩沖液洗一次去除殘留培養(yǎng)液。將細(xì)胞懸浮在少量 PBS 緩沖液中。加入五到十倍體積 RNAfixer, 混均。
4.白細(xì)胞對于全血中白細(xì)胞的保存，需將白細(xì)胞從紅細(xì)胞和血清中分離出來，并按組織培養(yǎng)細(xì)胞一樣處理后，白細(xì)胞便能有效地保存在 RNAfixer 中。不要將全血、血漿或血清中的 RNA 保存在 RNAfixer 中，因?yàn)樗鼈兊鞍缀窟^高，與 RNAfixer 混合后易形成不溶的沉淀。
5.**
**并不能在 RNAfixer 中生長，但是 RNAfixer 并不破壞**，E. coli 在 4℃保存一個月仍舊可以提出完整的 RNA。
RNAfixer 中樣本的存放：
1.存放在-80℃樣品長期保存用。將 RNA fixer 中樣本放置于 4℃過夜，然后將樣本撈出，盡量去除干凈 RNAfixer 液體，然后放置于-80℃。對于組織培養(yǎng)細(xì)胞，則不需要去除RNAfixer，直接冷凍于-80℃，并不會裂解細(xì)胞。樣品使用時可以在室溫融化，并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
2.存放在-20℃將 RNAfixer 中樣本放置于 4℃過夜，然后轉(zhuǎn)移到-20℃。在-20℃樣品并不會被冰凍,但是可能會形成一些結(jié)晶，這并不會影響將來的 RNA 提取。樣品使用時可以在室溫 融化，并且還可以再次冷凍而不影響 RNA 的完整性和產(chǎn)量。
3.存放在 4℃樣本可以在 4℃存放一個月。
4.存放于 25℃存放于 25℃樣本的 RNA 在一周內(nèi)保持完整，保存兩周的樣品 RNA 有輕微降解，勉強(qiáng)能用于northern analysis, 但是質(zhì)量足夠用于nuclease protection assay or RT-PCR 。
5.存放于 37℃存放于 37℃樣本的 RNA 在 24 小時內(nèi)保持完整，3 天的時候有部分降解。RNAfixer 保存樣本的 RNA 提取：將樣本從 RNAfixer 中取出,RNAfixer 可以直接倒入水池，用自來水沖即可，不需特殊處理。
1.組織
用干凈鑷子將樣本從 RNAfixer 中撈出，用吸水紙稍稍吸去殘留的 RNAfixer 后，可以和新鮮組織一樣按照液氮研磨，然后勻漿處理的標(biāo)準(zhǔn)程序進(jìn)行提取 RNA。
2.細(xì)胞
對于儲存在 RNAfixer 中的細(xì)胞有兩種選擇。一是去除 RNAfixer 后提取 RNA, 另一個是直接從細(xì)胞和 RNAfixer 的混合物提取。
1）去除 RNAfixer 后提取 RNA存放于 RNAfixer 中的細(xì)胞變得不那么脆弱，可以承受較高的離心速度而不被裂解。 我們有在 5000g 離心成功收集細(xì)胞的經(jīng)驗(yàn)，由于每種細(xì)胞的強(qiáng)度不一樣，可以先用不重要的細(xì)胞做個預(yù)試驗(yàn)，以保證在使用的速度下離心不會破壞細(xì)胞。另一個選擇是在離心前加等體積的 PBS 稀釋 RNAfixer 和細(xì)胞的混合物，以減少溶液的密度，使細(xì)胞溶液可以沉淀下來。
2）不去除 RNAfixer，直接提取 RNA
也可以直接加 10 倍體積的一步法提取試劑（如 TRIpure，TRI reagent）到細(xì)胞和RNAfixer 的混合物，然后按照正常步驟操作。

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