商品屬性:
貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
A-PJ1081-25T |
25T |
HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒 |
A-PJ1081-100TX20μl |
100TX20μl |
HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒 |
儲(chǔ)存條件:
HG TaqMan miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒請(qǐng)置于-20°C,可保存 2 年;避免反復(fù)凍融
產(chǎn)品介紹:
TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒采用加 A 法進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,加 A 法的反轉(zhuǎn)錄效率遠(yuǎn)高于莖環(huán)法,因 此,采用該方法可極大的提高檢測(cè)靈敏度(原理見(jiàn)圖 1)。 該試劑盒操作簡(jiǎn)單,僅需要兩步即可輕松完成 miRNA 的 cDNA 合成,合成的 cDNA 可用于所有 miRNA 的后續(xù)定 量檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄完畢后采用特異性的上游引物和接頭引物 進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增,F(xiàn)AM 標(biāo)記 TaqMan 探針作為熒光報(bào)告基 團(tuán)進(jìn)行定量檢測(cè)(原理見(jiàn)圖 1)。 TaqMan miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒專用于 miRNAs 分子的反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn),轉(zhuǎn)錄獲得的 cDNA 產(chǎn)物用于 TaqMan 定量 PCR 方法檢測(cè) miRNAs 分子
操作方法:
1 按以下組分在 0.2 ml EP 管中配制應(yīng)液
miRNA (5~100 ng/μl) 4 μl
5×TaqMan miRNA RT Solution A 1 μl
注意:不建議使用 Total RNA,Total RNA 試驗(yàn)結(jié)果通常差
于 miRNA。
2 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行加 A 反應(yīng):
37°C 30min
85°C 5min
3 反應(yīng)完畢后,在上述 5μl 反應(yīng)體系中加入如下試劑,并
混合均勻。
10×TaqMan miRNA RT Primer 2 μl
10×TaqMan miRNA RT Solution B 2 μl
H2O 11 μl
4 在 PCR 儀上按以下條件進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng):
30°C 5min
55°C 60min
95°C 5min
獲得的 cDNA 產(chǎn)物可用于多個(gè)目標(biāo) miRNA 的檢測(cè)。反轉(zhuǎn)錄完畢后獲得的 miRNA cDNA,可加入 20~80μl ddH20 稀釋2~5 倍,通常取 2μl 即可用于 HG TaqMan miRNA 定量 PCR試劑盒檢測(cè)。
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