商品屬性:
貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
A-Hc2032-100 次 |
100 次 |
全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒 |
A-Hc2032-100 次×2 |
100 次×2 |
全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒 |
儲(chǔ)存條件:
全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒保存條件:本試劑盒在室溫儲(chǔ)存 12 個(gè)月不影響使用效果。RNase A 建議-20℃長(zhǎng)期保 存。
產(chǎn)品介紹:
獨(dú)特的結(jié)合液/蛋白酶 K 迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后基因組 DNA 在 高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過(guò)一系列快速的漂洗-離心的 步驟,抑制物去除液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,*后低鹽的洗脫緩沖 液將純凈基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.重復(fù)性好:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.提取純度高,OD260/OD280 典型的比值達(dá) 1.7~1.9,可直接用于 PCR,Southern-blot和各種酶切反應(yīng)。
3.簡(jiǎn)單快速,一小時(shí)內(nèi)即可獲得超純的基因組 DNA。
4.廣泛:適用于血液、多種動(dòng)物細(xì)胞和動(dòng)物組織等。
注意事項(xiàng):
1.結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時(shí)可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在 37℃水浴幾分 鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2.避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3.結(jié)合液 CB 和抑制物去除液 IR 中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
4.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫, 但應(yīng)該確保批 pH 大于 7.5,pH 過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA 應(yīng)該保存在-20℃。 DNA 如果需要長(zhǎng)期保存,可以用 TE 緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng),使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
自備試劑:無(wú)水乙醇
操作步驟:
提示:**次使用前請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入指定量無(wú)水乙醇,充分混勻,加入后請(qǐng)及時(shí)在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!
如果需要去除 RNA,可在加蛋白酶 K 溶液前先加入 4μl RNaseA(10mg/ml)溶液振蕩 15sec,室溫放置 5 min1.處理材料
a. 血液
如提取材料為血液,可直接使用220μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液,不足220μl用緩沖液BB補(bǔ)足220μl,振蕩混勻后,直接進(jìn)行下一步驟。
注意:如需處理更大體積血液,如300μl-1ml,應(yīng)按以下步驟操作:在樣品中加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液(例如,300μl血液加入900μl紅細(xì)胞裂解液),顛倒混勻,室溫放置5 min,期間再顛倒混勻幾次。10,000rpm離心1min(若離心機(jī)*高轉(zhuǎn)速不允許,也可3000rpm離心5min,吸去上清,留下白細(xì)胞沉淀,加220μl緩沖液BB,振蕩至徹底混勻。10×紅細(xì)胞裂解液(SH406-01)本公司另外有售,可根據(jù)需要來(lái)決定購(gòu)買(mǎi)。(10× 紅細(xì)胞裂解液使用ddH2O稀釋成1×使用。)
b. 禽類等血液
如果處理血樣為禽類、鳥(niǎo)類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液,其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞,因此處理量 5-20μl,可加緩沖液 BB 補(bǔ)足 220μl 后進(jìn)行下面的步驟。
c. 貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞
貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞應(yīng)先處理為細(xì)胞懸液,然后 10,000rpm 離心 1min,棄上清,加 220μl緩沖液 BB,振蕩至徹底懸浮;
d. 動(dòng)物組織取 20-50mg 動(dòng)物組織在液氮中研磨成細(xì)粉,或用解剖刀切成微小碎塊后,轉(zhuǎn)入離心管中,加入 180μl 裂解液 TL 后,渦旋振蕩混勻。
2.提取基因組DNA時(shí)為**RNA,加入5μl RNase A(10mg/ml),振蕩混勻,室溫放置5 min。
3.加入20μl蛋白酶K,振蕩混勻,置于55℃水浴中消化處理。
a. 提取血液基因組時(shí),只需加入蛋白酶K混勻,即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
b. 提取細(xì)胞基因組時(shí),只需加入蛋白酶K混勻,即可繼續(xù)進(jìn)行下一步。
c. 提取組織基因組時(shí),加入蛋白酶K混勻后,在55℃放置,直至組織溶解,簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠,再進(jìn)行下一步驟。
注意:不同組織裂解時(shí)間不同,通常需1-3 h即可完成(鼠尾需要消化過(guò)夜),不會(huì)影響后續(xù)操作。每小時(shí)顛倒混合樣品2-3次,用水浴振蕩器也可。
4.加入220μl結(jié)合液CB并充分混勻后,置于70℃水浴10 min,等溶液變清亮,12,000rpm 短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
注意:加入結(jié)合液CB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀,一般70℃放置時(shí)會(huì)消失,不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮,說(shuō)明細(xì)胞裂解不徹底,可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA不純。當(dāng)血液體積≤200μl且沒(méi)有采用紅細(xì)胞裂解處理,或是樣本儲(chǔ)存條件不佳,水浴后顏色可能為深褐色,注意溶液中沒(méi)有團(tuán)塊等沉淀。
5.加入220μl的無(wú)水乙醇,充分振蕩混勻15sec,此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀,簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。
6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中12,000rpm 離心30sec,倒掉廢液,將吸附柱AC放回收集管中。
7.加入500μl抑制物去除劑IR,12,000rpm離心1min。倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
8.加入500μl漂洗液WB,12,000rpm離心30sec。(使用前請(qǐng)檢查是否已經(jīng)加入無(wú)水乙醇)倒掉收集管中的濾液。并將離心柱放回收集管中。
9.重復(fù)步驟8的操作。
10.將吸附柱AC柱放回收集管中,12,000rpm離心2min,倒掉廢液。將AC吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。
11.在吸附膜的中間部位加 50-100μl 洗脫緩沖液 EB(洗脫緩沖液事先在 65℃水浴中預(yù)熱效果更好),室溫放置 2-5min,12,000 rpm 離心 1min。為了提高基因組 DNA 的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱中,室溫放置 2-5min,12,000rpm 離心 1min。
注意:DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解。
公司正在出售的產(chǎn)品:
Protein L Magnetic Beads蛋白L磁珠 |
唾液彎曲桿菌PCR試劑盒 |
Bst 4.0 SYBR Green Mix |
紫蘇子染料法PCR鑒定試劑盒 |
液微生物RNA提取試劑盒 |
阪崎腸桿菌PCR試劑盒 |
液DNA提取試劑盒(帶證,膜吸附柱法) |
隱襲腐霉PCR檢測(cè)試劑盒 |
Bst 3.0 DNA/RNA聚合酶(32U/ul)無(wú)甘油 |
莢膜組織胞漿菌莢膜變種PCR試劑盒 |
9N (exo-) DNA Polymerase((2U/ul)) |
人腺病毒G52型PCR試劑盒 |
5×Q-Solution |
施氏油脂線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 |
2XRAPA HiFi PCR Mix(with dye) |
莢膜阿耶羅菌PCR試劑盒 |
2×Taq PCR MasterMix(for PAGE 含紅染料 ) |
莢膜阿耶羅菌PCR試劑盒 |
2×RAPA3G Multiplex PCR Mix |
蛇形毛圓線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒 |
10min毒DNA/RNA提取試劑盒 |
腸道病毒PCR檢測(cè)試劑盒 |
組織RNA提取試劑盒 |
抗鈣調(diào)su特異抗體ELISA試劑盒 |
中量核酸磁珠法提取試劑盒(液、清漿等) |
α半乳糖苷meiELISA試劑盒 |
質(zhì)粒小量快速提取試劑盒 ( 磁珠法) |
全血 / 組織 / 細(xì)胞基因組 DNA 快速提取試劑盒組織蛋白meiOELISA試劑盒 |
游離DNA提取試劑盒(帶證,膜吸附柱法) |
β-1,3-葡糖醛suan基移mei1ELISA試劑盒 |