商品屬性:
貨號 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
A-Hc2026-100次 |
100次 |
通用DNA純化回收試劑盒 |
儲存條件:
通用DNA純化回收試劑盒保存條件:本試劑盒在室溫儲存 12 個(gè)月不影響使用效果。
產(chǎn)品介紹:
在高離序鹽存在的情況下,DNA 片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除,*后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點(diǎn):
1.獨(dú)特的吸附柱設(shè)計(jì),消除了液體殘留及污染,并且洗脫體積*低可至 5μl。
2.使用了上等溶膠液,不含傳統(tǒng)溶膠液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。
3.獨(dú)特的溶膠液/結(jié)合液配方,將溶膠和結(jié)合兩種功能統(tǒng)一,因此一個(gè)試劑盒可以運(yùn)用于瓊脂糖 DNA 回收、PCR 產(chǎn)物清潔純化、酶切產(chǎn)物純化回收等多種情況,節(jié)省了需購買多種試劑盒的費(fèi)用。
4.溶膠液/結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色,便于觀察溶膠效果和監(jiān)測 pH 值變化從而達(dá)到*佳結(jié)合效果,大大提高回收效率。
5.可回收 50bp-25kb 片段,每個(gè)吸附柱可吸附 DNA 量為 5μg。
適用范圍:
適用于瓊脂糖凝膠 DNA 回收、PCR 反應(yīng)產(chǎn)物純化回收、酶切產(chǎn)物 DNA 片段純化回收、探針標(biāo)記后純化回收、DNA 樣品濃縮等。
注意事項(xiàng):
1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的,如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀,此時(shí)不應(yīng)該直接使用,可在 37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復(fù)澄清。使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫。
2.儲存于低溫(4℃或者-20℃)會(huì)造成溶液沉淀,影響使用效果,因此運(yùn)輸和儲存均在室溫下(15℃-25℃)進(jìn)行。
3.避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化,各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。
4.溶膠液/結(jié)合液中含有刺激性化合物,操作時(shí)要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí),要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.回收純化的 DNA 片段一般在 50bp 到 25kb 之間,過長、過短片段的回收效率迅速降低?;厥?DNA 的量和起始 DNA 的量、洗脫體積、DNA 片段大小有關(guān),一般為 5μg。100bp-5kb 的 DNA 片段,回收率可高達(dá) 85%-95%。大于 10kb 的 DNA片段,可減少洗脫體積,提高濃度。
6.切膠回收時(shí),紫外燈觀察對 DNA 片段有損壞作用,應(yīng)該盡可能使用能量低的長波紫外線,并且盡可能的縮短紫外線下處理的時(shí)間。
7.pH 值≤7.5 時(shí),吸附膜吸附 DNA 的效率*高。如果切下來的凝膠中含有電泳緩沖液太多,造成溶膠后溶膠液 pH 偏高,會(huì)導(dǎo)致回收率降低。溶膠后,如果溶膠液依舊保持黃色,說明 pH 正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明 pH 偏高,可在膠充分溶解后加 5-10μl 3M 醋酸鈉(pH5.2)將 pH 值調(diào)到 5-7(黃色)。
8.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA,不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫,但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5,pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA 片段應(yīng)該保存在-20℃。DNA 片段如果需要長期保存,可以用 TE 緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng),使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。
自備試劑:無水乙醇
操作步驟:
提示:**次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇,加入后請及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!
1.瓊脂糖凝膠 DNA 回收:
1)在長波紫外燈下,用干凈刀片將所需回收的 DNA 條帶切下,盡量切除不含 DNA的凝膠,得到凝膠體積越小越好。
2)將切下的含有 DNA 條帶凝膠放入 1.5ml 或 2ml 離心管。
3)加 500μl 體積溶膠/結(jié)合液 DB。(膠塊與溶膠/結(jié)合液比例 1:1 至 1:5,回收率不受影響。)
4)50℃水浴放置 10min(或直至膠完全溶解)。期間不斷溫和地上下翻轉(zhuǎn)離心管,以確保膠塊充分溶解。
5)將上一步所得溶液加入微量 DNA 吸附柱中(吸附柱放入收集管中),室溫放置 1min,12,000rpm 離心 1min,倒掉收集管中的廢液。
6)加入 500μl 漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm 離心 1min,棄掉廢液。
7)重復(fù)操作步驟 6。
8)將微量 DNA 吸附柱放回空收集管中,12,000rpm 離心 1min,盡量去除漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
9)取出微量 DNA 吸附柱,放入一個(gè)干凈的 1.5ml 離心管中,室溫放置數(shù)分鐘。
10)在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液 EB 10μl(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好),12,000rpm 離心 1min。如果需要較多量 DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心 1min。(注意:洗脫體積一般為 10μl,根據(jù)樣品濃度,洗脫體積 5μl 至 50μl 均可。)
2.PCR 產(chǎn)物或者酶切片段等 DNA 純化:
1)每 100μl PCR 擴(kuò)增后體系或者酶切后體系加入 500μl 溶膠/結(jié)合液 DB,充分混勻。(產(chǎn)物與溶膠/結(jié)合液比例 1:1 至 1:5,回收率不受影響。)
2)將上一步所得溶液加入微量 DNA 吸附柱中(吸附柱放入收集管中),室溫放置1min,12,000rpm 離心 1min,倒掉收集管中的廢液。
3)從此步驟開始和瓊脂糖凝膠 DNA 回收的操作步驟 6-10 完全一致,請參見瓊脂糖凝膠 DNA 回收的操作步驟 6-10。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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