商品屬性:
貨號 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
A-Hc2024-100次 |
100次 |
PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒 |
A-Hc2024-100 次×2 |
100 次×2 |
PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒 |
儲存條件:
PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒保存條件:本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果。
產(chǎn)品介紹:
在高離序鹽存在的情況下,DNA 片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除,*后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點:
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.使用了上等結合液,不含傳統(tǒng)結合液的碘化鈉和高氯酸鹽,不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應。
3.結合液調(diào)制成為了黃顏色,便于監(jiān)測 pH 值變化從而達到*佳結合效果,大大提高回收效率。
4.簡單快速、使用方便。
注意事項:
1.所有的溶液應該是澄清的,如果環(huán)境溫度低時溶液可能形成沉淀,此時不應該直接使用,可在 37℃水浴加熱幾分鐘,即可恢復澄清,使用前應該恢復到室溫. 2.儲存于低溫(4℃或者-20℃)會造成溶液沉淀,影響使用效果。
3.避免試劑長時間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化,各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。
4.結合液中含有刺激性化合物,操作時要戴乳膠手套,避免沾染皮膚,眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時,要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.回收純化的 DNA 片段一般在 100bp 到 40kb 之間,過長、過短片段的回收效率迅速降低。
6.回收 DNA 的量和起始 DNA 的量,洗脫體積,DNA 片斷大小有關。一般 1-20μg,100bp-5kb 的 DNA 片段,回收率可達 95%。
7.pH 值≤7.5 時,吸附膜吸附 DNA 的效率*高。如果待純化產(chǎn)物含有堿性物質(zhì)過多,造成和結合液混和后pH 偏高,會導致回收率降低。混和后,如果結合液依舊保持黃色,說明 pH 正常;如果變成橘紅色或者淡紫色,說明 pH 偏高,可加 5-10μl 3M 醋酸鈉(pH5.2)將 pH 值調(diào)到 5-7(黃色)。
8.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA,不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫,但應該確保 pH 大于 7.5pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫,DNA 片段應該保存在-20℃。DNA 片段如果需要長期保存,可以用 TE 緩沖液洗脫(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是 EDTA 可能影響下游酶切反應,使用時可以適當稀釋。
自備試劑:無水乙醇
操作步驟:
提示:**次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇,加入后請及時打鉤標記已加入乙醇,以免多次加入!
1.每 100μl PCR 擴增后體系或者酶切后體系加入 500μl 結合液 BB,充分混勻。(如果初始體系小于 100μl,請事先用雙蒸水調(diào)整至 100μl)。
2.將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中(吸附柱放入收集管中),室溫放置 1min,12,000rpm 離心 30-60sec,倒掉收集管中的廢液。
3.加入 500μl 漂洗液 WB(請先檢查是否已加入無水乙醇 !),12,000rpm 離心30sec,棄掉廢液。
4.重復操作步驟 3。
5.將吸附柱 EC 放回空收集管中,12,000rpm 離心 2min,盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
6.取出吸附柱 EC,放入一個干凈的離心管中,室溫放置數(shù)分鐘。
7.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液EB(洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱
效果更好),室溫放置 2min,12,000rpm 離心 1min。如果需要較多量 DNA,可將得到的溶液重新加入吸附柱中,離心 1min。(注意:洗脫體積越大,洗脫效率越高。 如果需要 DNA 濃度較高,可以適當減少洗脫體積, 但是*小體積不應少于 30μl, 體積過小降 DNA 洗脫效率,減少產(chǎn)量。)
公司正在出售的產(chǎn)品:
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