商品屬性：

儲存條件：

酵母高純質(zhì)粒小量快速提取試劑盒 ( 帶 lyticase)保存條件：本產(chǎn)品收到后按照上面指示溫度存放各成份，18 個月不影響使用效果。

產(chǎn)品介紹：

本試劑盒采用改進 SDS-堿裂解法裂解細胞并結(jié)合 lyticase 特異消化酵母細胞壁，能在 1 小時內(nèi)從酵母培養(yǎng)液中分離出高純度質(zhì)粒 DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除細胞壁后,然后堿裂法裂解細胞，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低 PH 值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒 DNA，再通過去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它**成分去除，*后低鹽、高 PH 值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)品特點：
1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好?？朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。
2.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、純度好，可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測序等各種分子生物學(xué)實驗。

注意事項：

1.**次使用時，將試劑盒所帶的全部 RNase A 加入溶液 YP1（終濃度 100μg/ml）置
于 4℃保存。如果溶液 YP1 中 RNase A 失活，提取的質(zhì)粒可能會有微量 RNA 殘留，在溶液 YP1 中補加 RNase A 即可。
2.環(huán)境溫度低時溶液YP2中 SDS可能會析出渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清,不要劇烈搖晃，以免形成過量的泡沫。
3.為避免降低活性,方便運輸，提供 Lyticase(2500U)為凍干粉狀，收到后，可短暫離心后，加入 250μl **水溶解配制成 10U/μl，因為反復(fù)凍融可能會降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分裝凍存,－20℃保存。
4.溶液 YP3 和去蛋白液 PD 中含有刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套，避免沾染皮膚、眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時，要用大量清水或者生理鹽水沖洗。
5.得到的質(zhì)粒 DNA 可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。OD260 值為 1 相當(dāng)于大約 50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為 2 條或者多條 DNA條帶，這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動位置不一造成,與提取物培養(yǎng)時間長短、提取時操作劇烈程度等有關(guān)。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過90%。
6. 用戶需要自備 Sorbitol buffer( 1M 山梨醇，0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巰基乙醇)。
配制方法：在 600 ml 去離子水里面溶解 182.2 克山梨醇，加入 200ml 0.5 M Na2EDTA(pH 8.0) ，不需要調(diào)節(jié) PH 值，定容到 1L，4℃保存。臨用前加 0.1%β-巰基乙醇(商品化的β-巰基乙醇摩爾濃度一般為 14M)。
7.菌體濃度檢測一般 OD600 值為 1 的時候,釀酒酵母細胞是 1-2x107 cells/ml，由于菌種和分光度計不同即使同樣細胞數(shù)量 OD 值變化也很大，以上僅供參考。
8.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保批 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒應(yīng)該保存在－20℃。質(zhì)粒 DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時可以適當(dāng)稀釋。
自備試劑：無水乙醇,Sorbitol buffer（1M 山梨醇，0.1M EDTA,14mM β-巰基乙醇）

操作步驟：

提示：
? **次使用前請先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇，充分混勻，加入后
請及時在方框打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入!
? 將 RNase A 全部加入溶液 YP1 中，混勻，每次使用后置于 2-8℃保存。? 要想得到更高的提取量，可將 YP3 溶液放在冰上預(yù)冷。
? 吸取使用量的 Sorbitol buffer 加入 0.1%β-巰基乙醇，回復(fù)到室溫備用。
1.向吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中）加 500μl 的平衡液 BL，12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
2.取 1.5ml 酵母培養(yǎng)物(不超過 5×10
7 cells)，12,000rpm 離心 30 sec，盡可能的吸棄上清，收集酵母細胞。
3.加入 600μl Sorbitol buffer，輕柔吹打充分重懸細胞，加入 Lyticase 50U（5μl，10U/μl），充分顛倒混勻，37℃溫育至少 30 min 消化細胞壁，中間可顛倒數(shù)次幫助消化。
4.12,000rpm 離心 1 min，盡可能吸棄上清，加入 250μl 溶液 YP1 重懸菌體沉淀，渦旋振蕩至徹底懸浮。
5.加 250μl 的溶液 YP2，溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4 -7 次使菌體充分裂解，室溫放置 4min。
6.加 350μl 溶液 YP3，立即溫和地上下翻轉(zhuǎn) 4 -7 次,充分混勻時會出現(xiàn)白色絮狀沉淀。冰上靜置 3-5 min，12,000rpm 離心 5 min，小心取上清。
7.將上一步所得上清加入吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 離心 30-60sec，倒掉收集管中的廢液。
8.加入 500μl 去蛋白液 PD，12,000rpm 離心 30-60 sec，棄廢液。
9.加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30-60 sec，棄掉廢液。
10.重復(fù)步驟 9。
11.將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
12.取出吸附柱 AC，放入一個干凈的離心管中，室溫放置幾分鐘。
13.在吸附膜的中間部位加 50μl-100μl 洗脫緩沖液 EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱效果更好），室溫放置 2 min，12,000rpm 離心 1 min。如果需要較多量質(zhì)粒，
可將得到的溶液重新加入離心吸附柱中，離心 1 min。（注意：若后續(xù)做測序，需使用 ddH2O 做洗脫液，并保證其 pH 值在 7.0-8.5 范圍 內(nèi)，pH 值低于 7.0 會降低洗脫效率。且 DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA 降解。）

公司正在出售的產(chǎn)品：