產(chǎn)品名稱：溶血性鏈球菌熒光PCR檢測試劑盒
產(chǎn)品貨號:FS-01P99978
操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
Ai-TBX3/FITC 熒光su標記轉錄因子Tbx3抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

MAPKK2 原活化蛋白激mei激meiMulti-class aibodies： 0.5mg

性結合球蛋白抗體 Ai-SHBG 0.2ml

SIGLEC14 英文名稱： 唾液suan結合性球蛋白樣凝集su14抗體 0.2ml

ELK4 英文名稱： 血清反應因子輔助蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-MDM2 (Ser166) 磷suan化雙微體2癌基因抗體  0.1ml

MAPKK2 原活化蛋白激mei激meiMulti-class aibodies： 0.5mg

Cardiotrophin 人心營養(yǎng)su-1Multi-class aibodies： 48T

Ai-Phospho-DARPP32 (Thr34) 磷suan化多巴胺/cAMP調(diào)節(jié)神經(jīng)磷蛋白抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh NeuroD1/NEUROD 神經(jīng)細胞分化因子1抗體  0.1ml

human Ultrasensitivity Thyroxine,u-T4 ELISA Kit 人高敏甲狀腺su 96T

TSHR () 英文名稱： 促甲狀腺su受體抗體(N端) 0.1ml

CD97 英文名稱： CD97抗體 0.1ml

Ai-Phospho-DARPP32 (Thr34) 磷suan化多巴胺/cAMP調(diào)節(jié)神經(jīng)磷蛋白抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

PIG54 英文名稱： 細胞增殖誘導蛋白54抗體 0.1ml

phospho-EGFR (Tyr1110) 英文名稱： 磷suan化表皮生長因子受體抗體 0.1ml

成骨相關轉錄因子抗體 Ai-Osx 0.1ml

Ai-Snake poison Protein/FITC 熒光su標記抗蛇毒蛋白抗體(中華眼鏡蛇)IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-NMDAR2A/NR2A (Tyr1246) 磷suan化谷氨suan受體2A抗體  0.1ml

CRP (C-reactive protin) C-反應蛋白(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
溶血性鏈球菌熒光PCR檢測試劑盒銠標準溶液(1000μg/ml,溶劑:2.0Mol/L HCl)2甲4氯suan 標準品  CAS號：7085-19-0 100MG石蠟切片肥大（MAST CELL）天青A（Azure A）（特異）原位染色試劑盒

銣標準溶液(1000μg/ml)吡咯二suan二乙酯 標準品  CAS號：135590-91-9 100MG凍切片肥大（MAST CELL）天青A（Azure A）原位染色試劑盒

錸標準溶液(1000μg/ml;溶劑：1.5mol/L硝suan)甲烯雌乙suan酯 標準品  CAS號：2919-66-6 100MG白分類染色試劑盒

二氧化硅標準溶液(1000μg/ml,介質：0.05mol/L NaOH)嘧菌標準品  CAS號： 110235-47-7 100mg通用型蘇木su伊紅染色試劑盒

銀標準溶液(1000μg/ml)縮節(jié) 標準品  CAS號：24307-26-4 100mg石蠟切片蘇木su伊紅染色試劑盒

銀標準溶液(100μg/mL,基體:1%HNO3)硫雙威 標準品  CAS號：59669-26-0 250mg凍切片蘇木su伊紅染色試劑盒

鈧標準溶液(1000μg/mL,基體：10%HCL)甲磺磺隆 標準品  CAS號：208465-21-8 50mg蘇木su伊紅染色試劑盒

硒標準溶液(1000μg/ml,介質：2.0mol/L 硝suan)硝磺tong 標準品  CAS號：104206-82-8 100mg石蠟切片蘇木su染色試劑盒