產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正?，F象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
植物總ATP酶（total ATPase）活性比色法定量檢測試劑盒20次冬瓜皮探針法PCR鑒定試劑盒

甲羥戊酸（MEVALONATE）通路分析試劑專題炙黃芪染料法PCR鑒定試劑盒

名稱規(guī)格小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)Elisa測定試劑盒

通用性甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次大鼠骨保護素(OPG)Elisa測定試劑盒

細胞甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次大鼠降鈣素(CT)Elisa測定試劑盒

組織甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次大鼠白介素4(IL-4)Elisa測定試劑盒

體液甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次豬心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)Elisa測定試劑盒

甲羥戊酸（mevalonate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次雞17羥皮質類固醇(17-OHCS)Elisa測定試劑盒

通用性5－磷酸甲羥戊酸（ mevalonate 5-phosphate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次雞層連蛋白/板層素(LN)Elisa測定試劑盒

通用性5－焦磷酸甲羥戊酸（mevalonate 5-pyrophosphate）含量高效液相層析-質譜法定量檢測試劑盒20次蕈堿型乙酰膽堿受體M3抗體流式組化

細胞3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶比色法20次抗Ⅲ型膠原抗體流式組化（Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原）

定量檢測試劑盒上皮特異性抗原抗體流式組化

組織3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶比色法20次Antigen抗體流式組化

定量檢測試劑盒瘦素受體抗體流式組化（長）IHC WB

血液3-羥-3-甲戊二酰輔酶A（HMG-COA）還原酶比色法20次鼠抗人促黃體**素抗體流式組化
腸道病毒C組探針法熒光定量RT-PCR試劑盒TRA16  受體相關蛋白16抗體三 Standard for GC

TRA16   孤兒受體相關蛋白抗體4，4'-二氨基二苯砜 97%

TRADD  死亡區(qū)的腫瘤壞死因子受體1相關蛋白抗體碳酸胍 99%

TRAF1  腫瘤壞死因子受體相關因子1抗體硫酸胍 99%

TRAF2  腫瘤壞死因子受體相關因子2抗體鋅粒 99.99% metals basis

TRAF3/CD40bp  腫瘤壞死因子受體相關蛋白3抗體超純鋅粒 棒狀,99.9999% metals basis

TRAF6  腫瘤壞死因子受體相關因子6抗體鋅 粉末,99.99% metals basis

TRAIL  腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體抗體鋅 99.999% metals basis