產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
細胞磷酸化酶活性染色試劑盒50次人腫瘤特異性抗原（TSA） ELISA試劑盒, TSA  ELISA kit

冰凍切片磷酸化酶活性染色試劑盒50次人抗中性?？贵w（ANA）ELISA試劑盒, ANA ELISA kit

全組織磷酸化酶活性染色試劑盒10次人青少年2型血色素沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2（HFE2）ELISA試劑盒,

細胞琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒50次大鼠新生甲狀腺素（NN-T4）ELISA試劑盒,

冰凍切片琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒50次巨噬來源的趨化因子（MDC/CCL22）ELISA試劑盒--動物，人

全組織琥珀酸脫氫酶活性染色試劑盒10次WORT 瓊脂用于,特別是酵母菌的計數(shù)和增菌培養(yǎng)（Merck方法）

細胞b-葡糖苷酸酶活性染色試劑盒50次麥 康凱瓊脂     用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)（OXOID方法）

冰凍切片b-葡糖苷酸酶活性染色試劑盒50次β-丙氨酸

細胞捺脂丙酸鹽脂酶活性染色試劑盒50次6,7-二甲氧基 6,7-Dimethylesculetin

冰凍切片捺脂丙酸鹽脂酶活性染色試劑盒50次Super Script Ⅱ陰性逆轉錄酶

細胞總脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色試劑盒50次對基-β-D-吡喃半乳糖苷

冰凍切片總脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色試劑盒50次6-甲基-7甲氧基

全組織總脂酶活性格莫瑞（Gomori）染色試劑盒50次5-鳥苷一磷酸二鈉鹽

細胞抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性染色試劑盒50次人P鈣黏蛋白/胎盤鈣黏蛋白（P-cad）ELISA試劑盒,

冰凍切片抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）活性染色試劑盒50次人單純皰疹?、裥涂贵w（HSVⅠAb）ELISA試劑盒,HSVⅠAb ELISA
漢坦病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒GLUR2  谷氨酸受體2抗體二氧化銥 Ir 86%

GLUR3/GRIA 3  谷氨酸受體3抗體銥粉 99.99% metals basis

GLUR4  谷氨酸受體4抗體銥粉 99.9% metals basis

NR2C/NMDAR2C  谷氨酸受體2C抗體（N端）三氯化銥  試劑級,Ir>52%

NR2A/NMDAR2A  谷氨酸受體2A抗體四氯化銥(IV) 水合物 Ir 48.0 - 55.0 %

Phospho-NMDAR2A (Tyr1246)  磷酸化谷氨酸受體2A抗體氯亞鉑酸 AR

Phospho-NMDAR2A (Tyr1325)  磷酸化谷氨酸受體2A抗體醋酸鈀 AR，Pd 46.0 - 48.0 %

NR2B/NMDAR2B  谷氨酸受體2B抗體氧化鈀 Pd ≥85%