操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
品紅亞硫酸鹽（FUCHSIN SULFITE）原位間接染色試劑盒γ-L-谷氨酰-β-萘酰

石蠟切片組織衰老特異性晚期脂褐素高碘酸希爾（PAS）法50次D-半胱氨酸

品紅亞硫酸鹽（FUCHSIN SULFITE）原位直接染色試劑盒L-高苯丙氨酸

P16蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次人肝素輔因子Ⅱ（HCⅡ）ELISA試劑盒, HCⅡ ELISA kit

P21蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次人胃蛋白酶原A（PG-A）ELISA試劑盒,

P16基因表達北方雜交分析試劑盒5次人水通道蛋白3（AQP-3）ELISA試劑盒,

P21基因表達北方雜交分析試劑盒5次人α-輔肌動蛋白3（ACTN-3）ELISA試劑盒,

端粒酶活性TRAP電泳分析試劑盒10次人溴脫氧核苷尿嘧啶（BrdU）ELISA試劑盒,

端粒酶活性TRAP實時定量檢測試劑盒20次人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa（GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61）ELISA試劑盒,

人體hTERT表達實時定量檢測試劑盒20次人血纖蛋白原（Fbg）ELISA試劑盒,

人體hTERT基因甲基化檢測試劑盒20次人?；さ鞍祝ˋSP）ELISA試劑盒,

動物細胞β-半乳糖苷酶活性化學發(fā)光法定量檢測試劑盒20次小鼠層連蛋白/板層素（LN）ELISA試劑盒,

動物細胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量檢測試劑盒20次小鼠糖原磷酸化酶同工酶MM（GP-MM）ELISA試劑盒,

細胞周期檢測試劑專題小鼠骨橋素（OPN）ELISA試劑盒,

名稱規(guī)格小鼠抗心肌抗體（AMA）ELISA試劑盒,
植物專用蛋白酶抑制劑混合液，100Xphospho-Bcl-xL(Ser62)  磷酸化Bcl-xL(pSer62)抗體一異 分析標準品

BCHE (NT)  丁酰膽堿酯酶抗體(N端)四氧化三鐵 99.99% metals basis

BCHE  丁酰膽堿酯酶單克隆抗體茚 分析標準品，用于環(huán)境分析，>99.0%(GC)

BCHE (CT)  丁酰膽堿酯酶抗體(C端)高氯酸鐵 CP

BDNF  腦源神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體2-亞氨基硫雜環(huán)戊烷鹽酸鹽 98%

BECN1  BECLIN-1抗體DL-異檸檬酸三鈉 92%

Beta-casein  β-酪蛋白抗體高氯酸鐵 CP, low chloride

BAFF/CD257  TNF家族B激活因子抗體異基氯化鎂 2.0 M in diethyl ether