產(chǎn)品特點：

1、不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大，非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

成分	規(guī)格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
離心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脫液	10ml
說明書	1份

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

 一管式植物DNA提取試劑盒（一管式植物DNAout）" " 50次"

 一管式病毒DNA提取試劑盒（一管式病毒DNAout）" " 50次"

 柱式病毒DNA提取試劑盒（柱式病毒DNAout）" " 50次"

 柱式植物DNA提取試劑盒（柱式植物DNAout）" " 50次"

 柱式動物線粒體DNA提取試劑盒，PCR級（柱式動物線粒體DNAout）" " 50次"

 柱式動物線粒體DNA提取試劑盒，測序級（柱式動物線粒體DNAout）" " 15次"

 柱式植物RNA提取試劑盒（柱式植物RNAout）（不含DNA酶）" " 50次"

 柱式病毒RNA提取試劑盒（柱式病毒RNAout）" " 50次" 柱式病毒RNA-DNA雙提試劑盒（柱式病毒DNA-RNAout）" " 50次"

天凈沙RNase型（原固相RNase劑）" " 250 mL"

天凈沙RNaseB型（原液相RNase）" " 1.5 mL"

 天凈沙RNase劑C型（原氣相RNase）" " 120 mL"

 柱式動物RNA提取試劑盒（柱式動物RNAout）（柱式Trizol）" " 50次"

 PCR級甜菜堿溶液，5M" " 1.5 mL"

菌體內(nèi)**0mL

精提酵母tRNA溶液B（Carrier RNA），5mg/mL 1.5 mL

柱式植物RNA提取試劑盒2.0（柱式植物RNAout 2.0）（含DNA酶) 50次

" Tris飽和酚-氯仿-異戊醇混合液（DNA提取用）（25:24:1）" " 250 mL"

" 樣本保存液含染料（粉紅色）" " 2.5L"

" 樣本保存液（不含染料）" " 2.5L"

" 樣本保存液含染料（橙黃色）" " 2.5L"

" 非滅活型病毒樣本保存液（非細胞培養(yǎng)用，橙黃色）" " 2.5L"

細胞游離膽固醇毛地黃皂苷法 DIGITONIN 高氯酸萘醌 PAN 染色試劑盒 測定

冰凍切片總膽固醇高氯酸萘醌 PAN 染色試劑盒 測定

特殊石蠟切片總膽固醇高氯酸萘醌 PAN 間接染色試劑盒 測定

細胞總膽固醇高氯酸萘醌 PAN 染色試劑盒 測定

冰凍切片中性脂質(zhì)油紅O染色試劑盒 測定

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)油紅O間接染色試劑盒 測定

細胞中性脂質(zhì)油紅O染色試劑盒 測定

冰凍切片中性脂質(zhì)蘇丹黑染色試劑盒 測定

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)蘇丹黑直接染色試劑盒 測定

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)蘇丹黑間接染色試劑盒 測定

細胞中性脂質(zhì)蘇丹黑染色試劑盒 測定

冰凍切片中性脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒 測定

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅直接染色試劑盒 測定

特殊石蠟切片中性脂質(zhì)尼羅紅間接染色試劑盒 測定

細胞中性脂質(zhì)尼羅紅染色試劑盒 測定

冰凍切片膽色素普歇 Pouchet 染色試劑盒 測定

石蠟切片膽色素普歇 Pouchet 染色試劑盒 測定

柱式動物DNA提取試劑盒（柱式動物DNAout）細胞糖原高碘酸希爾 PAS 法染色試劑盒 測定

石蠟切片透明質(zhì)酸染色試劑盒 測定

石蠟切片網(wǎng)硬蛋白 RETICULIN 染色試劑盒 測定

細胞黑色素 MELANIN 染色試劑盒 測定

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。