實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：腦膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
玳瑁（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Ketanserin胰島抗原12/核轉(zhuǎn)錄因子SOX13抗體包裝1g

丹參（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： DL-Octopamine HCl有絲分裂相關(guān)蛋白INSC抗體包裝5g

丹參素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Sulindac磷酸化核因子NFκB抑制蛋白激酶i抗體包裝5g

丹參素鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： SulindacRAN結(jié)合蛋白7抗體包裝25g

丹參酮IIA(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tropic acid兔抗人γ-鏈包裝5g

丹參酮IIA-磺酸鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 2-Ketoglutaric acid球蛋白超家族成員B抗體包裝1g

丹參酮I（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 2-Ketoglutaric acid六磷酸肌激酶3抗體包裝25g

丹酚酸A（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Cabozantinib(BMS907351)干擾素kappa蛋白抗體包裝5g

丹酚酸B（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： H-D-SER-OET HCL白介素1α/IL-1α抗體包裝1g

丹酚酸B二酯英文名稱： Asenapine Maleate白介素1α/IL-1α抗體包裝5g

丹酚酸C（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Trityl candesartan cilexetil磷酸化白介素2受體β鏈抗體包裝100g

丹酚酸D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tamoxifen胰島素樣蛋白3抗體包裝25g

丹酚酸F英文名稱： Cefotiam hydrochloride內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白a1抗體包裝5g

丹皮酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Cefotiam hydrochloride重組人白介素18抗體包裝25g

丹皮酚新苷英文名稱： (2E,4S)-4-Hydroxy-3,7-dimethyl-2,6-octadien-1-yl beta-D-glucopyranosideα胰蛋白酶重鏈H4抗體包裝5g
KNS-89細(xì)胞WAL 14507 [DSM 19850]Human SUPT5H (Transcription elongation factor SPT5) ELISA KITAlias: SUPT5HELISAKitReactivity: Human

假灰鏈霉菌Human TPRA1 (Transmembrane protein adipocyte-associated 1 homolog) ELISA KITAlias: TPRA1ELISAKitReactivity: Human

嗜糖黃桿菌Human IGFLR1 (IGF-like family receptor 1) ELISA KITAlias: IGFLR1ELISAKitReactivity: Human

雙重輪絲鏈霉菌Human TCHHL1 (Trichohyalin-like protein 1) ELISA KITAlias: TCHHL1ELISAKitReactivity: Human

頂青霉Human TAP2 (Antigen peptide transporter 2) ELISA KITAlias: TAP2ELISAKitReactivity: Human

Nesterenkonia flavaHuman TMPPE (Transmembrane protein with metallophosphoesterase domain) ELISA KITAlias: TMPPEELISAKitReactivity: Human

Human HADHB (Trifunctional enzyme subunit beta, mitochondrial) ELISA KITAlias: HADHBELISAKitReactivity: Human

釀酒酵母Human TRMU (Mitochondrial tRNA-specific 2-thiouridylase 1) ELISA KITAlias: TRMUELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。