產(chǎn)品名稱：真皮成纖維細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化）

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

苯酰新烏頭原堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Regorafenib(BAY 73-4506)內(nèi)皮凝集素HL1抗體包裝1g

苯酰氧化芍藥苷英文名稱： Ostarine,GTx-024干擾素α抗體包裝250mg

比枯枯靈,右旋荷包牡丹堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： XTT sodium salt白介素-17F抗體包裝1g

蓽茇（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone白介素6抗體(N端)包裝5g

蓽澄茄（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： (2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone白介素6抗體包裝1g

蓖麻子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Macitentan干擾素epsilon 1蛋白抗體包裝25g

蝙蝠葛堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： M344磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體包裝5g

蝙蝠葛諾林堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 2-Nitroimidazole磷酸化白介素1受體1抗體包裝25g

蝙蝠葛蘇林堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 4-(Trifluoromethyl)-1H-imidazole白介素3抗體包裝5g

扁柏雙黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 2-Methyl-4-trifluoromethylimidazole異戊烯焦磷酸1抗體包裝1g

扁桃苷/苦杏仁苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 2-Aminoimidazole hemisulfate磷酸化胰島素受體底物-1抗體包裝25g

扁蓄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Odanacatib;MK0822磷酸化胰島素受體底物-1抗體包裝5g

表白樺脂酸（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 4-NITROCATECHOL胰島素誘導(dǎo)基因1抗體包裝1mg

表兒茶素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 4-NITROCATECHOLFC段γ受體3/球蛋白G Fc段受體III抗體包裝1g

表兒茶素沒(méi)食子酸酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Troglitazone(CS-045)磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶4抗體包裝25g
HSF(SV40)細(xì)胞阿達(dá)青霉Human UCN2(Urocortin-2) ELISA KitAlias: UCN2|Urocortin-2|Urocortin-relatedpeptide|Stresscopin-relatedpeptide|UrocortinII|UcnII|SRP|URP|UII|U-IIELISAKitReactivity: Human

煙曲霉Human ITPA(Inosine triphosphate pyrophosphatase) ELISA KitAlias: ITPA|Inosinetriphosphatepyrophosphatase|ITPase|Inosinetriphosphatase|Putativeoncogeneproteinhlc14-06-p|Nucleoside-triphosphatepyrophosphatase|NTPase|Nucleoside-triphosphatediphosphatase|Non-canonicalpurineNTPpyrophosphatase|Non-standardpurineNTPpyrophosphatase|My049|OK|SW-cl.9|C20orf37ELISAKitReactivity: Human

成晶節(jié)桿菌Human RAB8A(Ras-related protein Rab-8A) ELISA KitAlias: RAB8A|Ras-relatedproteinRab-8A|Oncogenec-mel|MEL|RAB8ELISAKitReactivity: Human

隆德假單胞菌Human NDRG1(Protein NDRG1) ELISA KitAlias: NDRG1|ProteinNDRG1|Rit42|Reducingagentsandtunicamycin-responsiveprotein|RTP|Nickel-specificinductionproteinCap43|Differentiation-relatedgene1protein|DRG-1|N-mycdownstream-regulatedgene1protein|CAP43|DRG1|GC4|NDR1|NMSL|TDD5|CMT4D|HMSNL|RIT42|TARG1|PROXY1|tunicamycin-responsiveproteinELISAKitReactivity: Human

噬果膠黃桿菌Human GBA(Glucosylceramidase) ELISA KitAlias: GBA|Glucosylceramidase|Imiglucerase|D-glucosyl-N-acylsphingosineglucohydrolase|Beta-glucocerebrosidase|Beta-GC|Acidbeta-glucosidase|Alglucerase|GC|GLUC|GBA1|glucosidase|beta|acid|acid(includesglucosylceramidase)|lysosomalglucocerebrosidaseELISAKitReactivity: Human

大腸埃希氏菌Human VSNL1(Visinin-like protein 1) ELISA KitAlias: VSNL1|Visinin-likeprotein1|VILIP|VLP-1|Hippocalcin-likeprotein3|HLP3|HPCAL3|HUVISL1|VILIP-1ELISAKitReactivity: Human

鴨疫里默氏桿菌Human OGG1(N-glycosylase/DNA lyase) ELISA KitAlias: OGG1|N-glycosylase|DNAlyase|8-hydroxyguanineDNAglycosylase|8-oxoguanineDNAglycosylase|APlyase|DNA-apurinicorapyrimidinicsitelyase|HOGG1|MMH|MUTMOGH1HMMHELISAKitReactivity: Human

天麻萌發(fā)菌8103號(hào)*Human FASN(Fatty acid synthase) ELISA KitAlias: FASN|Fattyacidsynthase|FAS|OA-519|SDR27X1ELISAKitReactivity: Human