實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
貨號(hào)
hl60（hl-60）細(xì)胞
詳見說明書
FS-X5453
產(chǎn)品名稱：早幼粒白血病細(xì)胞
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
柏子仁（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Bromothymol blue sodium saltKB抑制蛋白激酶γ抗體包裝5mg
敗醬草（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tedizolid free base磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體包裝25ml
斑蝥素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tedizolid phosphate;TR-701FA磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體包裝5ml
板藍(lán)根（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： MBTH hydrochloride hydrate磷酸化KB抑制蛋白激酶α/IKK α 抗體包裝1g
半邊蓮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Erythrosin B sodium salt磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體包裝5g
半甘草異黃酮B英文名稱： Dabrafenib,GSK2118436A磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體包裝100g
半夏（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Acetyl tributyl citrate磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體包裝25g
半枝蓮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Triethyl acetyl citrate 磷酸化KB抑制蛋白激酶γ抗體包裝5g
寶藿苷I,羊藿次苷II(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Alginic acid磷酸化KB抑制蛋白激酶β抗體包裝100g
寶藿苷II；大花羊藿苷A；意卡瑞苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： 6-O-Palmitoyl-L-ascorbic Acid干擾素alpha誘導(dǎo)蛋白6抗體包裝25g
寶藿苷V英文名稱： Aspartame白介素-17E抗體包裝500g
寶藿苷VII英文名稱： Potassium clavulanate磷酸化胰島素受體底物p-IRS-1/2抗體包裝5g
杯莧甾酮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： ROBININtRNA異亮氨酸連接酶抗體包裝100g
北蒼術(shù)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Amfebutamone Hydrochloride整合素α2抗體包裝1g
球毛殼Human CPM(Carboxypeptidase M) ELISA KitAlias: CPM|CarboxypeptidaseMELISAKitReactivity: Human
Human BTG3(Protein BTG3) ELISA KitAlias: BTG3|ProteinBTG3|ProteinTob5|Abundantinneuroepitheliumareaprotein|BTGfamilymember3|ANA|TOB5|TOB55|TOFAELISAKitReactivity: Human
印度芽孢桿菌Human ACTN4(Alpha-actinin-4) ELISA KitAlias: ACTN4|Alpha-actinin-4|F-actincross-linkingprotein|Non-musclealpha-actinin4|ACTININ-4|FSGS|FSGS1ELISAKitReactivity: Human
泛菌屬Human NDUFA6(NADH dehydrogenase [ubiquinone] 1 alpha subcomplex subunit 6) ELISA KitAlias: NDUFA6|NADHdehydrogenase[ubiquinone]1alphasubcomplexsubunit6|NADH-ubiquinoneoxidoreductaseB14subunit|ComplexI-B14|CI-B14|LYRmotif-containingprotein6|B14|LYRM6|CI-B14|NADHB14ELISAKitReactivity: Human
短小芽孢桿菌Human LAMP2(Lysosome-associated membrane glycoprotein 2) ELISA KitAlias: LAMP2|Lysosome-associatedmembraneglycoprotein2|CD107antigen-likefamilymemberB|LAMPB|LGP110|CD107b|CD107bantigen|LAMP-2|LAMPBELISAKitReactivity: Human
嗜鹽梗孢酵母Human ADAM28(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 28) ELISA KitAlias: ADAM28|Disintegrinandmetalloproteinasedomain-containingprotein28|ADAM28|Epididymialmetalloproteinase-like|disintegrin-like|andcysteine-richproteinII|eMDCII|Metalloproteinase-like|disintegrin-like|andcysteine-richproteinL|MDC-L|ADAM23|MDCL|MDC-Lm|MDC-Ls|eMDCIIELISAKitReactivity: Human
枝孢屬Human ARID4B(AT-rich interactive domain-containing protein 4B) ELISA KitAlias: ARID4B|AT-richinteractivedomain-containingprotein4B|ARIDdomain-containingprotein4B|Retinoblastoma-bindingprotein1-like1|Histonedeacetyla*****plexsubunitSAP180|180kDaSin3-associatedpolypeptide|Sin3-associatedpolypeptidep180|Breastcancer-associatedantigenBRCAA1|BRCAA1|RBBP1L1|RBP1L1|SAP180ELISAKitReactivity: Human
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、50ml離心筒2個(gè)
百蕊草素I/山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷/阿福豆苷(標(biāo)準(zhǔn)...英文名稱： Chromotropic acid disodium salt dihydrate白介素-1受體拮抗劑抗體包裝25mg
hl60（hl-60）細(xì)胞蠟樣芽孢桿菌Human BDG(beta-D-glucan) ELISA KitAlias: beta-D-glucanELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：