冷凍保存細胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：腎上皮細胞

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達成長期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國際接軌，我司代理多種知名的國際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

白土苓(短柱肖菝契)（標準品）英文名稱： DL-Mandelic acid磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體包裝1g

白土苓(華南肖菝葜)（標準品）英文名稱： Ascorbic acid；vitamin C磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體包裝5g

白薇（標準品）英文名稱： Ascorbic acid；vitamin C纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運同源蛋白46抗體包裝100g

白鮮堿(標準品)英文名稱： Octadecanamine白介素-10受體a抗體包裝25g

白鮮皮（標準品）英文名稱： Sorbic acid白介素-13受體a1抗體包裝500g

白楊素(標準品）英文名稱： Luliconazole相關(guān)鳥苷三磷酸酶基因抗體包裝1g

白楊素-7-O-龍膽二糖苷英文名稱： 5-Nitro-1,10-phenanthroline白介素-13受體a2抗體包裝25g

白英（標準品）英文名稱： Rotundic acid嗜酸粒趨化蛋白CCL1抗體包裝5g

白芷（標準品）英文名稱： Bromophenol blue sodium salt磷酸化胰島素樣生長因子1受體抗體包裝1g

百部(對葉百部)（標準品）英文名稱： Thymol blue sodium salt胰島素降解酶抗體包裝5g

百部（直立百部）（標準品）英文名稱： Sodium tetraphenylboron白介素12抗體包裝100ml

百合（標準品）英文名稱： Sodium sulfosalicylate白介素4抗體包裝25g

百兩金素A（標準品）英文名稱： Nitroso R Salt胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白9抗體包裝5g

百秋李(標準品)英文名稱： Rhodizonic acid sodium salt干擾素-gamma受體2抗體包裝10mg

百蕊草（標準品）英文名稱： Indigo carmine白介素27受體抗體包裝100mg
HKb-20細胞松針散斑殼Human OTC(Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial) ELISA KitAlias: OTC|Ornithinecarbamoyltransferase|mitochondrial|Ornithinetranscarbamylase|OTCaseELISAKitReactivity: Human

同絲毛殼Human CA3(Carbonic anhydrase 3) ELISA KitAlias: CA3|CarbonicAnhydraseIII|MuscleSpecific|Carbonicanhydrase3ELISAKitReactivity: Human

釀酒酵母Human ISG15(Ubiquitin-like protein ISG15) ELISA KitAlias: ISG15(InterferonStimulatedGene15)|UCRP|G1P2|IFI15|IP17|G1P2interferon-induced17-kDa|15-kDaprotein|interferon|alpha-inducibleprotein(cloneIFI-15K)|Interferon-induced15kDaprotein|Interferon-induced17kDaprotein|interferon-stimulatedprotein|15kDa|ISG15ubiquitin-likemodifier|Ubiquitincross-reactiveprotein|ubiquitin-likeproteinISG15|UCRPIP17ELISAKitReactivity: Human

貴州青霉Human AMFR(E3 ubiquitin-protein ligase AMFR) ELISA KitAlias: AMFR|E3ubiquitin-proteinligaseAMFR|gp78|Autocrinemotilityfactorreceptor|AMFreceptor|RINGfingerprotein45|GP78|RNF45ELISAKitReactivity: Human

考克氏菌屬Human DDX42(ATP-dependent RNA helicase DDX42) ELISA KitAlias: DDX42|ATP-dependentRNAhelicaseDDX42|Splicingfactor3B-associated125kDaprotein|SF3b125|SF3bDEADboxprotein|RNAhelicase-relatedprotein|RNAHP|DEADboxprotein42|RNAhelicase-likeprotein|RHELPELISAKitReactivity: Human

酒色青霉Human OCLN(Occludin) ELISA KitAlias: OCLN(Occludin)|BLCPMGELISAKitReactivity: Human

Human LARP7(La-related protein 7) ELISA KitAlias: LARP7|La-relatedprotein7|Laribonucleoproteindomainfamilymember7|P-TEFb-interactionproteinfor7SKstability|PIP7S|HDCMA18PELISAKitReactivity: Human

加納鏈霉菌Human COL10A1(Collagen alpha-1(X) chain) ELISA KitAlias: COL10A1|Collagenalpha-1(X)chain|COL10-A1|CollagenTypeX|COL10ELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器備。