公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

7-氧基-4’-羥基異黃酮(黃豆苷元雜質(zhì))（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Phloxine B三磷酸肌苷焦磷酸酶抗體包裝1g

7-羥基-4-基（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Eriochrome Red B吲哚2,3-雙加氧酶抗體包裝1g

7-羥基;傘形花內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Fast Red RL Salt白介素19抗體包裝5g

7-乙基喜樹堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Fast Red Violet LB Salt抑制素A/Inhibin α抗體包裝1g

8-O-乙酰山梔苷酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Amaranth胰島素基因增強(qiáng)結(jié)合蛋白1/2抗體包裝25g

8-姜酚（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Brilliant ponceau 5R磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體包裝5g

808猩紅英文名稱： Phenosafranine磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體包裝1g

9-氧基喜樹堿英文名稱： Sirius Rose BB磷酸化白介素-1受體相關(guān)激酶1抗體包裝5g

9’-丹酚酸B單酯英文名稱： Ruthenium Red干擾素調(diào)節(jié)因子3包裝25g

9’’’-丹酚酸B單酯英文名稱： Erythrosin B磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子3包裝5g

alpha-熊果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Acid Red 88干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體包裝100g

Bullatine G（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Acid Red 183磷酸化干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體包裝25g

Cimiracemoside英文名稱： Acid Red 9磷酸化胰島素受體底物-1抗體包裝1g

Clemaphenol A英文名稱： Malachite green磷酸化胰島素受體底物-1抗體包裝25MG

Clematichinenoside C英文名稱： Brilliant green磷酸化胰島素受體底物-1抗體包裝250mg
HCCS-94細(xì)胞鏈霉菌Human RET(Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret) ELISA KitAlias: RET|Proto-oncogenetyrosine-proteinkinasereceptorRet|Cadherinfamilymember12|Proto-oncogenec-Ret|Hirschsprungdisease1|multipleendocrineneoplasiaandmedullarythyroidcarcinoma1|retproto-oncogene|RETtransformingsequence|CDHR16|MEN2A|MEN2B|CDHF12|CDHR16|PTC|RET51ELISAKitReactivity: Human

黃皮疣柄牛肝菌Human CES2(Cocaine esterase) ELISA KitAlias: CES2|Cocaineesterase|Carboxylesterase2|CE-2|hCE-2|Methylumbelliferyl-acetatedeacetylase2|ICE|CES2A1|PCE-2ELISAKitReactivity: Human

籬邊粘褶菌Human CASR(Extracellular calcium-sensing receptor) ELISA KitAlias: CASR|Extracellularcalcium-sensingreceptor|CaSR|PaRathyroidcellcalcium-sensingreceptor|PCaR1|GPRC2A|CAR|EIG8|FHH|FIH|HHC|HHC1|NSHPTELISAKitReactivity: Human

綠色木霉=木素木霉Human VIPR2(Vasoactive intestinal polypeptide receptor 2) ELISA KitAlias: VIPR2|Vasoactiveintestinalpolypeptidereceptor2|VIP-R-2|VPAC2|Helodermin-preferringVIPreceptor|Pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptidetypeIIIreceptor|PACAPtypeIIIreceptor|PACAP-R-3|PACAP-R3|VIP2RELISAKitReactivity: Human

暗孢節(jié)菱孢菌Human PPA1(Inorganic pyrophosphatase) ELISA KitAlias: PPA1|Inorganicpyrophosphatase|Pyrophosphatephospho-hydrolase|PPase|IOPPP|PP|PP1|inorganicdiphosphatase|cytosolicinorganicpyrophosphataseELISAKitReactivity: Human

韓國(guó)梅奇酵母Human CHAD(Chondroadherin) ELISA KitAlias: CHAD|Chondroadherin|Cartilageleucine-richprotein|SLRR4AELISAKitReactivity: Human

金龜子綠僵菌Human PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA KitAlias: PTGES|ProstaglandinEsynthase|p53-inducedgene12protein|MicrosomalglutathioneS-transferase1-like1|MGST1-L1|MicrosomalprostaglandinEsynthase1|MPGES-1|MGST1L1|MPGES1|PGES|PIG12|MGST-IV|MGST1-L1|MPGES|PP102|PP1294|TP53I12|mPGES-1ELISAKitReactivity: Human

短芽胞桿菌Human WTAP(Pre-mRNA-splicing regulator WTAP) ELISA KitAlias: WTAP|Pre-mRNA-splicingregulatorWTAP|Wilmstumor1-associatingprotein|Female-lethal(2)Dhomolog|hFL(2)D|WT1-associatedprotein|KIAA0105ELISAKitReactivity: Human