實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
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H9/HTLV-IIIB細(xì)胞 |
詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
FS-X5438 |
產(chǎn)品名稱：T**瘤白血病細(xì)胞
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
4-基傘形酮-β-D-木糖苷英文名稱： N-Acetylglycine小鼠抗聚組氨酸單克隆抗體包裝5g
4-羥基喹唑啉英文名稱： Ac-Ala-OH鐵調(diào)節(jié)蛋白/鐵調(diào)素抗體包裝1g
4-硝基兒茶酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-Acetyl-D-alanine熱休克蛋白J1抗體包裝5g
4’-O-基補(bǔ)骨脂查爾酮B英文名稱： N-Acetyl-L-Glutamine發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-5抗體包裝25g
4β-羥基黃芪紫檀烷苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-Acetyl-L-Tyrosine磷酸化熱休克蛋白90α抗體包裝5g
5,7,4'-三羥基-8-基二氫黃酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Methyl orange磷酸化組蛋白H2AX抗體包裝100g
5,7-二羥基色原酮英文名稱： Disperse Orange 13磷酸化組蛋白H3抗體包裝25g
5-O-基維斯阿米-4'-O-β-D-呋喃芹糖基-...英文名稱： Acid Orange 74磷酸化組蛋白H3抗體包裝5g
5-O-基維斯阿米苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Crocein Orange G磷酸化組蛋白H3抗體包裝5g
5-羥基糠（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Isatin組蛋白去乙?；?抗體包裝100g
5-羥色酸（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Nebivolol hydrochlorideA型流感病H5N1凝集素包裝25g
5-羥色鹽酸鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Nebivolol hydrochloride人巨病UL49蛋白抗體包裝500g
6'''-阿魏酰斯皮諾素英文名稱： Nuclear fast red肝核因子1β/HNF-1β抗體包裝1g
6''-O-二?；玖夏拒沼⑽拿Q： CarmineHHLA3蛋白抗體包裝25g
6''-二酸沙苑子苷單酯英文名稱： Bromophenol redHHIP樣蛋白2抗體包裝5g
H9/HTLV-IIIB細(xì)胞芽孢桿菌Human CFL1(Cofilin-1) ELISA KitAlias: CFL1(Cofilin1|Non-Muscle)|Cofilin-1|18kDaphosphoprotein|p18|Cofilin|non-muscleisoformELISAKitReactivity: Human
葡萄座腔菌Human LGALS3BP(Galectin-3-binding protein) ELISA KitAlias: LGALS3BP|Galectin-3-bindingprotein|Tumor-associatedantigen90K|Mac-2-bindingprotein|MAC2BP|Mac-2BP|Basementmembraneautoantigenp105|Lectingalactoside-bindingsoluble3-bindingprotein|M2BPELISAKitReactivity: Human
稻生黃單胞菌*Human CFLAR(CASP8 and FADD-like apoptosis regulator) ELISA KitAlias: CFLAR|CASP8andFADD-likeapoptosisregulator|InhibitorofFLICE|I-FLICE|FADD-likeantiapoptoticmolecule1|FLAME-1|CellularFLICE-likeinhibitoryprotein|c-FLIP|Caspase-likeapoptosisregulatoryprotein|CLARP|Usurpin|MACH-relatedinduceroftoxicity|MRIT|Caspasehomolog|CASH|Caspase-eight-relatedprotein|Casper|CASP8AP1ELISAKitReactivity: Human
果生鏈核盤(pán)菌Human ADCYAP1R1(Pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide type I receptor) ELISA KitAlias: ADCYAP1R1|Pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptidetypeIreceptor|PACAPtypeIreceptor|PACAP-R-1|PACAP-R1|PAC1|PAC1R|PACAPR|PACAPRIELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human PPA1(Inorganic pyrophosphatase) ELISA KitAlias: PPA1|Inorganicpyrophosphatase|Pyrophosphatephospho-hydrolase|PPase|IOPPP|PP|PP1|inorganicdiphosphatase|cytosolicinorganicpyrophosphataseELISAKitReactivity: Human
竹針孢座囊菌Human RET(Proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret) ELISA KitAlias: RET|Proto-oncogenetyrosine-proteinkinasereceptorRet|Cadherinfamilymember12|Proto-oncogenec-Ret|Hirschsprungdisease1|multipleendocrineneoplasiaandmedullarythyroidcarcinoma1|retproto-oncogene|RETtransformingsequence|CDHR16|MEN2A|MEN2B|CDHF12|CDHR16|PTC|RET51ELISAKitReactivity: Human
局限青霉Human CASR(Extracellular calcium-sensing receptor) ELISA KitAlias: CASR|Extracellularcalcium-sensingreceptor|CaSR|PaRathyroidcellcalcium-sensingreceptor|PCaR1|GPRC2A|CAR|EIG8|FHH|FIH|HHC|HHC1|NSHPTELISAKitReactivity: Human
新疆纖細(xì)芽孢桿菌Human VIPR2(Vasoactive intestinal polypeptide receptor 2) ELISA KitAlias: VIPR2|Vasoactiveintestinalpolypeptidereceptor2|VIP-R-2|VPAC2|Helodermin-preferringVIPreceptor|Pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptidetypeIIIreceptor|PACAPtypeIIIreceptor|PACAP-R-3|PACAP-R3|VIP2RELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。