冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱：肝癌細(xì)胞亞型（過(guò)表達(dá)谷氨酰氨合成酶）

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

3,29-二苯?；闃侨嗜?biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Fmoc-Ala-OH瘤病調(diào)控因子1抗體（鋅指蛋白395）包裝5g

3,3'-二基鞣花酸-4'-O-葡萄糖苷英文名稱： Fmoc-Phe-OH人類狀瘤病18 E6單克隆抗體包裝1g

3,6-二芥子?；崽牵?biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Fmoc-Val-OH異質(zhì)核糖核蛋白F抗體包裝25g

3-(3-羥基苯基)酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Fmoc-Asn(Trt)-OH異質(zhì)核糖核蛋白K抗體包裝5g

3-Deoxyaconitine英文名稱： Fmoc-Lys(Z)-OH異質(zhì)核糖核蛋白L抗體包裝5g

3-O-Acetyl-16α-hydroxytrame...英文名稱： Fmoc-Lys-OH·HClHER2受體單克隆抗體包裝1g

3-O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李...英文名稱： Oxyresveratrol癌分化因子P45抗體 Heregulinβ包裝5g

3-O-乙?；?16α-羥基松苓新酸英文名稱： Oxyresveratrol肝脂酶抗體包裝1g

3’-氧基芹菜苷；柯伊利素-7-O-葡萄糖-2-O-...英文名稱： Acetyl-resveratrol磷酸化組蛋白去乙?；?抗體包裝250mg

3β,7β,12β-三羥基-11,15-二羰基-羊毛甾...英文名稱： Acetyl-resveratrol解旋酶樣轉(zhuǎn)錄因子抗體包裝1g

3β,7β,15β-三羥基-11-羰基-羊毛甾烷-8-...英文名稱： Fmoc-Lys(Mtt)-OH三羥基三基輔酶A合成酶2抗體包裝250mg

3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-（標(biāo)...英文名稱： Fmoc-Thr(Bzl)-OH人類白抗原A抗體包裝1g

4'-去鬼臼素英文名稱： Fmoc-Lys-OH羥類固脫氫酶17β2抗體包裝250mg

4'-去氧基表鬼臼素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Fmoc-L-aspartic acid β-benzyl ester羥類固脫氫酶17β-HSD抗體包裝5g

4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基呫噸酮英文名稱： Fmoc-Asp(OH)-OtBu人肝單克隆抗體/肝特異性抗原抗體包裝1g
GS-HEPG2細(xì)胞香菇Human NFATC1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1) ELISA KitAlias: NFATC1|NFAT2|NFATtranscriptioncomplexcytosoliccomponent|NFATC|NF-ATC|NF-ATc1|nuclearfactorofactivatedT-cells|cytoplasmic|calcineurin-dependent1|NuclearFactorofActivatedTCellsC1ELISAKitReactivity: Human

枯草芽胞桿菌Human NEO1(Neogenin) ELISA KitAlias: NEO1|Neogenin|NEO|NGN|ImmunoglobulinsuperfamilyDCCsubclassmember2|neogenin1|neogeninhomolog1ELISAKitReactivity: Human

淺金鏈霉菌Human MADCAM1(Mucosal addressin cell adhesion molecule 1) ELISA KitAlias: MADCAM1|MACAM1|MAdCAM-1|mucosaladdressincelladhesionmolecule1|mucosaladdressincelladhesionmolecule-1|mucosalvascularaddressincelladhesionmolecule1ELISAKitReactivity: Human

米曲霉Human PACRG(Parkin coregulated gene protein) ELISA KitAlias: PACRG|Parkincoregulatedgeneprotein|Molecularchaperonin-bindingprotein|PARK2coregulatedgeneproteinELISAKitReactivity: Human

煙管菌Human CX3CR1(CX3C chemokine receptor 1) ELISA KitAlias: CX3CR1|CMKbRL1|V28|Betachemokinereceptor-like1|chemokine(C-C)receptor-like1|CMKBRL1|CMK-BRL1|CMK-BRL-1|CMKDR1|CX3Cchemokinereceptor1|Fractalkinereceptor|Gprotein-coupledreceptor13|GPR13G-proteincoupledreceptor13|GPRV28|V28C-X3-CCKR-1ELISAKitReactivity: Human

糖化酵母Human SNX1(Sorting nexin-1) ELISA KitAlias: SNX1|Sortingnexin-1ELISAKitReactivity: Human

少根根霉戴爾變種Human NAIP(Baculoviral IAP repeat-containing protein 1) ELISA KitAlias: NAIP(NeuronalApoptosisInhibitoryProtein)|BIRC1|NLRB1|baculoviralIAPrepeat-containing1|NLRfamily|apoptosisinhibitoryprotein|NLRfamily|BIRdomaincontaining1|nucleotide-bindingoligomerizationdomain|leucinerichrepeatandBIRdomaincontaining1|psineuronalapoptosisinhibitoryprotein|psiNAIPELISAKitReactivity: Human

越桔假絲酵母Human JUP(Junction plakoglobin) ELISA KitAlias: JUP|Junctionplakoglobin|Desmoplakin-3|Cateningamma|DesmoplakinIIIELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。