實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個；
4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
貨號
COLO320細胞
詳見說明書
FS-X5429
產(chǎn)品名稱：結(jié)直腸腺癌細胞
公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
(+)-兒茶素（標準品）英文名稱： Pranoprofen人巨病UL49蛋白抗體包裝25g
(+)-兒茶素合物（標準品）英文名稱： Albumin(bovine fraction V);BSA人類白抗原E抗體包裝5g
(+)松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷(標準品)英文名稱： Nalidixic acidE3連接酶抑制素受體3抗體包裝5mg
(-)-Holostyligone英文名稱： Glycogen from oyster魚精蛋白P1抗體包裝250mg
(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→...英文名稱： Ethidium bromide(EB)肝生長因子抗體包裝1g
(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷英文名稱： Besifloxacin HCl組蛋白去乙酰化酶2抗體包裝5g
(2R)-5,7-二氧基二氫黃酮英文名稱： Betaine人乙肝病Large S蛋白抗體包裝100mg
(2R,3R)-3,7,4'-三羥基-5-氧基-8-...英文名稱： BetaineHER4抗體包裝50mg
(2R,3S)-3,7,4'-三羥基-5-氧基-8-...英文名稱： Uric acid原基因1/bri3結(jié)合蛋白抗體包裝1g
(7S,7'R)-雙(3,4-亞二氧苯基)-rel-...英文名稱： Uric acid肝病核心抗原C區(qū)抗體包裝1g
(E)-N-Caffeoylputrescine英文名稱： Domiphen bromide型肝炎病-NS1抗體包裝25g
(R,S)-告依春英文名稱： Betaine monohydrate型肝炎病-NS3抗體包裝5g
(R型)人參皂苷Rg2（標準品）英文名稱： Naphthol AS-D acetate型肝炎病-NS4a抗體包裝100g
(R型)人參皂苷Rg3(標準品)英文名稱： Zinc protoporphyrinA型病H5N1-M2蛋白抗體包裝25g
淤泥大洋芽孢桿菌Human FCGBP(IgGFc-binding protein) ELISA KitAlias: FCGBP|IgGFc-bindingprotein|Fcgamma-bindingproteinantigen|FcgammaBPELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human PIBF(Progesterone-induced-blocking factor) ELISA KitAlias: PIBF1(Progesterone-induced-blockingfactor1)|C13orf24|chromosome13openreadingframe24|KIAA1008|PIBF|progesteroneimmunomodulatorybindingfactor1|progesterone-inducedblockingfactor1|RP11-505F3.1ELISAKitReactivity: Human
毛木耳(紫木耳、黃背木耳)Human HLA-E(HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E) ELISA KitAlias: MHCE|HLA-E(MajorHistocompatibilityComplexClassIE)|HLA-6.2|HLAE|MHCclassIantigenE|HLAclassIhistocompatibilityantigen|alphachainEELISAKitReactivity: Human
金針菇Human MRC1(Macrophage mannose receptor 1) ELISA KitAlias: MRC1(MannoseReceptorCType1)|CD206|CLEC13D|MMR|CD206antigen|C-typelectindomainfamily13memberD|mannosereceptor|Ctype1|Macrophagemannosereceptor1ELISAKitReactivity: Human
穿孔素假單胞菌Human NARG2(NMDA receptor-regulated protein 2) ELISA KitAlias: NARG2(NMDAreceptor-regulatedprotein2)|BRCC1ELISAKitReactivity: Human
嗜淀粉乳桿菌Human PYY2(Putative peptide YY-2) ELISA KitAlias: PYY2|PutativepeptideYY-2|PutativepeptideYY2ELISAKitReactivity: Human
Human ZFAND6(AN1-type zinc finger protein 6) ELISA KitAlias: ZFAND6(AN1-typezincfingerprotein6)|HT032|AWP1|ZA20D3|AssociatedwithPRK1protein|ZincfingerA20domain-containingprotein3ELISAKitReactivity: Human
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3、50ml離心筒2個
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙...英文名稱： Pranoprofen型流感病血凝素抗體（H2N2）包裝100g
COLO320細胞氧化微桿菌Human LY6G6F(Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6f) ELISA KitAlias: LY6G6F|Lymphocyteantigen6complexlocusproteinG6f|C6orf21|G6F|LY6G6D|NG32ELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：