實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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A549-RFP細胞 |
詳見說明書 |
FS-X5421 |
產(chǎn)品名稱：肺癌細胞
公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
銀杏內酯A(標準品)英文名稱： DL-HistidineHEATR4蛋白抗體包裝5g
銀杏內酯B(標準品)英文名稱： DL-Histidine·HCl透明質酸及粘蛋白1抗體包裝1g
銀杏內酯C(標準品)英文名稱： DL-Homophenylalanine轉錄因子HES7抗體包裝5g
銀杏內酯J(標準品)英文名稱： DL-Homoserine宮頸黏液蛋白相關蛋白抗體包裝1g
銀杏內酯K（標準品）英文名稱： Crizotinib HCl,PF-02341066 HCl流感病H3N8血凝素抗體包裝25g
澤瀉C-23-醋酸酯;澤瀉C單乙酸酯英文名稱： DL-Lysine·HCl流感病H3N7血凝素抗體包裝5g
澤瀉F(標準品)英文名稱： DL-Norvaline流感病H3N1血凝素抗體包裝100mg
粘委陵菜（標準品）英文名稱： DL-Norvaline同源盒蛋白HoxB3抗體包裝50mg
戰(zhàn)骨（標準品）英文名稱： DL-Pyroglutamic acid遺傳性血色病蛋白相關蛋白1抗體包裝1g
獐牙菜苷（標準品）英文名稱： DL-tert-Leucine甘油吸收/轉運蛋白GUP1抗體包裝250mg
獐牙菜苦苷(標準品)英文名稱： N-Acetyl-DL-methionineHHIP蛋白抗體包裝25g
樟腦（標準品）英文名稱： DL-Homocysteine 亞鐵氧化酶抗體包裝5g
掌葉防已堿；巴馬汀，黃藤素；(標準品)英文名稱： m-Fluoro-DL-tyrosine 鳥苷酸釋放因子p532蛋白抗體包裝1g
柘木（標準品）英文名稱： Calpain Inhibitor I(ALLN) HERC2 E3泛素蛋白連接酶抗體包裝5g
浙貝母（標準品）英文名稱： DL-Ala-DL-AlaHERC3 E3泛素蛋白連接酶抗體包裝1g
A549-RFP細胞鞘氨醇菌屬Human DEFA1(Defensin Alpha 1, Neutrophil) ELISA KitAlias: DEFA1|DEF1|HNP-1|HP1|MRS|alpha2|DEFA1B|DEFA2|defensin|alpha1|myeloid-relatedsequence|defensin|alpha1|HP-1|myeloid-relatedsequence|neutrophildefensin1|alpha-Defensin1ELISAKitReactivity: Human
腐皮鐮孢Human CCR7(C-C chemokine receptor type 7) ELISA KitAlias: CCR7|CD197|BLR2|C-Cchemokinereceptortype7|C-CCKR-7|CC-CKR-7|CCR-7|CD197|CD197antigen|CDw197|CCchemokinereceptor7|chemokine(C-Cmotif)receptor7|CMKBR7|chemokine(C-C)receptor7|EBI1|EBV-inducedGprotein-coupledreceptor1|EBV-inducedG-proteincoupledreceptor1|Epstein-Barrvirusinducedgene1|Epstein-BarrvirusinducedG-proteincoupledreceptor|Epstein-Barrvirus-inducedG-proteincoupledreceptor1|EVI1|lymphocyte-specificGprotein-coupledpeptidereceptor|MIP-3betareceptorELISAKitReactivity: Human
平菇Human CSNK2B(Casein kinase II subunit beta) ELISA KitAlias: CSNK2B|CaseinkinaseIIsubunitbeta|CKIIbeta|Phosvitin|ProteinG5a|CK2N|G5A|CK2B|CSK2B|caseinkinase2|betapolypeptide|CKIIbeta|ProteinG5aELISAKitReactivity: Human
黃色金黃桿菌Human MSTN(Growth/differentiation factor 8) ELISA KitAlias: MSTN(Myostatin)|GDF-8|GDF8|growthdifferentiationfactor8|growth|differentiationfactor8ELISAKitReactivity: Human
長根小奧德蘑Human SFRP4(Secreted frizzled-related protein 4) ELISA KitAlias: SFRP4(Secretedfrizzled-relatedprotein4)|DDC-4|sFRP-4|FRP-4|FRP-AP|frpHE|FrzB2|Frizzledprotein|Humanendometrium|secretedfrizzled-relatedprotein4|secretedfrizzled-relatedprotein4ELISAKitReactivity: Human
亞膜畢赤酵母Human SLC25A20(Mitochondrial carnitine/acylcarnitine carrier protein) ELISA KitAlias: SLC25A20(Mitochondrialcarnitine|acylcarnitinecarrierprotein)|CAC|CACT|Carnitine|acylcarnitinetranslocase|Solutecarrierfamily25member20ELISAKitReactivity: Human
繩狀籃狀菌Human ETFβ(Electron transfer flavoprotein subunit beta) ELISA KitAlias: ETFβ(Electrontransferflavoproteinsubunitbeta)|FP585|Beta-ETFELISAKitReactivity: Human
生根根瘤菌Human NEBL(Nebulette) ELISA KitAlias: NEBL(Nebulette)|LNEBL|Actin-bindingZ-diskproteinELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。