
產(chǎn)品名稱:結(jié)腸癌細(xì)胞
培養(yǎng)基:1640
狀態(tài):貼壁
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
貨號(hào)
FET細(xì)胞
詳見說(shuō)明書
FS-X5405
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好,我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù),同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1)細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu),可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基,含10% DMSO,適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案:
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案,必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基,于2°C至8°C下儲(chǔ)存,直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度,計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀,將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞,使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞,使溫度每分鐘大約降低1°C?;蛘?,將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè);
4、培養(yǎng)皿1個(gè),細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺(tái);
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)21875-091),90%;胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DL-LysineHHLA1蛋白抗體包裝250mg
香蜂草苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DL-Arginine Hydrochloride心肌肌球蛋白重鏈抗體包裝1g
香附(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L(-)-Carnitine 異質(zhì)性核糖核蛋白M抗體包裝1g
香加皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Levocarnitine;L(-)-Carnitine附睪分泌蛋白4抗體包裝5g
香荊芥酚(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Glutamic acid monosodium salt hydrate鐵硫簇整合同源物2蛋白抗體包裝1g
香蒲新苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Glutamine HIG1區(qū)域家族成員2A抗體包裝250mg
香薷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glutathione (Reduced);GSH結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白抗體包裝25g
香葉木素-7-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glutathione (Reduced)高遷移率族蛋白B4抗體包裝5g
香葉木素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glutathione(Oxidized)硫酸肝素糖蛋白1抗體抗體包裝1g
香櫞(枸櫞)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: DL-Isoleucine叉頭蛋白J1抗體包裝5g
香櫞(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: H-Lys-OH.HCl艾滋病病抗體包裝25g
香紫蘇(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Ornithine monohydrochloride艾滋病病抗體包裝5g
香紫蘇內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Aspartic acid艾滋病病抗體包裝1g
襄五脂素英文名稱: L-Aspartic acid結(jié)合珠蛋白相關(guān)蛋白抗體包裝5g
消旋山莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: L-Cysteine hydrochloride,anhydrousL-組氨酸脫羧酶抗體包裝100mg
大腸埃希菌Human ACR(Acrosin) ELISA KitAlias: ACR|Acrosin|ACRSELISAKitReactivity: Human
灰樹花Human ANGPTL2(Angiopoietin-related protein 2) ELISA KitAlias: ANGPTL2|Angiopoietin-relatedprotein2|Angiopoietin-likeprotein2|ARP2|HARP|ANGRP2ELISAKitReactivity: Human
根瘤菌Human TLR7(Toll-like receptor 7) ELISA KitAlias: TLR7|Toll-likereceptor7ELISAKitReactivity: Human
澳大利亞糖絲菌Human EREG(Proepiregulin) ELISA KitAlias: EREG|Proepiregulin|ER|EPR|epiregulinELISAKitReactivity: Human
根瘤菌Human TLR7(Toll-like receptor 7) ELISA KitAlias: TLR7|Toll-likereceptor7ELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human ACR(Acrosin) ELISA KitAlias: ACR|Acrosin|ACRSELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human PROM1(Prominin-1) ELISA KitAlias: PROM1|Prominin-1|AntigenAC133|Prominin-likeprotein1|MSTP061|PROML1|AC133|CD133|CORD12|MCDR2|RP41|STGD4ELISAKitReactivity: Human
來(lái)源:結(jié)腸癌
實(shí)驗(yàn)材料:
3、50ml離心筒2個(gè)
FET細(xì)胞Sphingomonas abaciHuman ANXA2(Annexin A2) ELISA KitAlias: ANXA2|AnnexinA2|LipocortinII|Chromobindin-8|Calpactin-1heavychain|CalpactinIheavychain|p36|ProteinI|PlacentalanticoagulantproteinIV|PAP-IV|AnnexinII|Annexin-2|ANX2|ANX2L4|CAL1H|LPC2D|LIP2|LPC2ELISAKitReactivity: Human