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產(chǎn)品名稱：小鼠乳腺癌細胞
來源：乳腺癌；雌性；C57BL/6

培養(yǎng)基：1640

狀態(tài)：貼壁
實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 

石吊蘭素英文名稱： D-Mannose神經(jīng)生長相關(guān)蛋白43包裝1g

石斛酚（標準品）英文名稱： N-Octanoyl-N-methylglucamine3-磷酸甘油脫氫酶（兔來源組化用抗體）包裝5g

石斛堿（標準品）英文名稱： N-Decanoyl-N-methylglucamine 3-磷酸甘油脫氫酶單克隆抗體(內(nèi)參抗體)包裝1g

石見穿（標準品）英文名稱： n-Octyl-β-D-Thioglucopyranoside生長停滯特異性蛋白2家族1抗體包裝5g

石椒草（標準品）英文名稱： D(+)-Raffinose pentahydrateG蛋白偶聯(lián)受體97抗體包裝1g

石榴皮（標準品）英文名稱： D-SorbitolG蛋白結(jié)合蛋白7抗體包裝250mg

石榴皮鞣素；安石榴林（標準品）英文名稱： N-Octyl-β-D-glucopyranoside綠色熒光蛋白抗體包裝25g

石榴子（標準品）英文名稱： L-(+)-Ribose綠色熒光蛋白抗體包裝5g

石杉堿（標準品）英文名稱： L-(+)-RiboseG蛋白通路抑制蛋白1抗體包裝1g

矢車菊素-3-O-葡萄糖苷(標準品）英文名稱： 2-Deoxy-L-ribose膠質(zhì)系源性神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α2抗體包裝5g

使君子（使君子仁）（標準品）英文名稱： 4-Methylumbelliferyl-β-D-xylopyranoside Printable Reviews核突觸蛋白-γ抗體包裝1g

首烏藤（標準品）英文名稱： 2-Deoxy-D-Ribose粒-巨噬克隆激因子抗體包裝5g

熟地黃（標準品）英文名稱： D-Galactose谷胱甘肽還原酶抗體包裝5ml

鼠尾草酚（標準品）英文名稱： D-Galactose胰高血糖素樣肽-1抗體包裝1g

鼠尾草酸（標準品）英文名稱： Hydrazine dihydrochloride顆粒蛋白前體抗體包裝25g
PY8119細胞微白螺孢菌Human AQP9(Aquaporin-9) ELISA KitAlias: AQP9(Aquaporin-9)|Aquaglyceroporin-9|Smallsolutechannel1ELISAKitReactivity: Human

細極鏈格孢Human AKR1B1(Aldose reductase) ELISA KitAlias: AKR1B1(Aldosereductase)|Aldo-ketoreductasefamily1memberB1ELISAKitReactivity: Human

黑曲霉Human ADIPOR1(Adiponectin receptor protein 1) ELISA KitAlias: ADIPOR1|ACDCR1|CGI45|PAQR1|TESBP1A|ACDCR1|adiponectinreceptor1|adiponectinreceptorprotein1|ADR1|CGI45|FLJ42464|PAQR1FLJ25385|ProgestinandadipoQreceptorfamilymemberI|TESBP1AELISAKitReactivity: Human

煙曲霉Human GP6(Platelet glycoprotein VI) ELISA KitAlias: GP6|Glycoprotein6|glycoproteinVI(platelet)|GPIV|GPVIplateletcollagenreceptor|plateletglycoproteinVIELISAKitReactivity: Human

乳桿菌屬Human SOD3(Extracellular superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA KitAlias: SOD3(Extracellularsuperoxidedismutase[Cu-Zn])|EC-SOD|extracellularsuperoxidedismutase[Cu-Zn]|superoxidedismutase3|extracellularELISAKitReactivity: Human

側(cè)耳Human PRDX1(Peroxiredoxin-1) ELISA KitAlias: PRDX1|NKEF-A|PRDX1|PRX1|TDPX2|Naturalkillercell-enhancingfactorA|naturalkiller-enhancingfactorA|NKEFA|NKEF-A|PAG|PAGAMSP23|PAGB|peroxiredoxin1|peroxiredoxin-1|prolifeRation-associatedgeneA|ProlifeRation-associatedgeneprotein|PRX1|PRXI|TDPX2|Thioredoxinperoxidase2|Thioredoxin-dependentperoxidereductase2ELISAKitReactivity: Human

戴爾根霉Human LPCAT3(Lysophospholipid acyltransferase 5) ELISA KitAlias: LPCAT3(Lysophospholipidacyltransferase5)ELISAKitReactivity: Human

第三梭菌Human OXM(Oxyntomodulin) ELISA KitAlias: OXM(Oxyntomodulin)ELISAKitReactivity: Human