實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細(xì)胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
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IFRS1細(xì)胞 |
詳見說明書 |
FS-X5354 |
產(chǎn)品名稱：大鼠雪旺細(xì)胞
來源：雪旺細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM
狀態(tài)：貼壁
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
雷公藤內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tantalum standard磷酸化gamma氨基丁酸B型受體1抗體包裝100mg
雷公藤內(nèi)酯酮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： lurium standard磷酸化谷氨酸受體2抗體包裝25g
雷公藤寧堿A英文名稱： Terbium standard磷酸化鳥苷酸調(diào)節(jié)蛋白12抗體包裝5g
雷公藤乙素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Vanadium solution珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝10g
類葉升麻苷,毛蕊花糖苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Yttrium standard谷胱甘肽過氧化酶3包裝1g
藜蘆英文名稱： Zinc standard谷胱甘肽過氧化酶4抗體包裝1g
里卡靈A英文名稱： Zinc standard高爾基體膜蛋白GP73抗體包裝5g
利卡靈-B;利卡靈B英文名稱： Vamidothion standard solutionG蛋白偶聯(lián)受體172B抗體包裝1g
利血平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Vacuum pump oil中心B相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
櫟櫻酸(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Vacuum pump oilG蛋白轉(zhuǎn)錄因子α3抗體包裝5g
連錢草（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Vacuum pump oilG蛋白偶聯(lián)受體124抗體（腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記物）包裝10ml
連翹（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Vacuum pump oil半乳糖凝集素1抗體包裝50ml
連翹苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Violuric acid monohydrateα葡萄糖苷酶2抗體包裝25g
連翹酯苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Vitamin E acetate半乳糖凝集素7抗體包裝25g
連翹酯苷B（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Uniconazole特異性囊腫病液體蛋白15抗體包裝5g
IFRS1細(xì)胞pCMV-HA(pCMV-HA-N)Human NRTN(Neurturin) ELISA KitAlias: NRTN|NTNELISAKitReactivity: Human
格氏乳球菌Human AXIN2(Axin-2) ELISA KitAlias: AXIN2|AxisInhibitor2|AXIL|Conductin|MGC10366|MGC126582|Axil|axin2|axin-2|Axin-likeprotein|Axisinhibitionprotein2|conductinELISAKitReactivity: Human
脫皮毛球馬勃*Human VASP(Vasodilator-stimulated phosphoprotein) ELISA KitAlias: VASPELISAKitReactivity: Human
金灰青霉Human PPP1CA(Serine/threonine-protein phosphatase PP1-alpha catalytic subunit) ELISA KitAlias: PPP1CA|PPP1A|PP-1AELISAKitReactivity: Human
香菇Human TRIM3(Tripartite motif-containing protein 3) ELISA KitAlias: TRIM3|RINGfingerprotein97|Brain-expressedRINGfingerprotein|RINGfingerprotein22|BERP|RNF22|RNF97ELISAKitReactivity: Human
黑曲霉Human TOP1(DNA topoisomerase 1) ELISA KitAlias: TOP1|DNAtopoisomeraseIELISAKitReactivity: Human
蒼白桿菌屬Human PTPRF(Receptor-type tyrosine-protein phosphatase F) ELISA KitAlias: PTPRF|Leukocytecommonantigenrelated|LAR)ELISAKitReactivity: Human
灰黃鏈霉菌Human AFM(Afamin) ELISA KitAlias: AFM|ALB2ALBAALFafaminALB2alpha-Alb|ALBAalpha-albumin|ALF|Alpha-Alb|Alpha-albuminELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。