實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
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NCI-H250細(xì)胞 |
詳見說(shuō)明書 |
FS-X5331 |
產(chǎn)品名稱：小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
來(lái)源：小細(xì)胞肺癌；男性
培養(yǎng)基：1640
狀態(tài)：半貼壁
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
關(guān)黃柏（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Methyl orange凝血因子10抗體包裝5g
管花苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Methyl Red sodium salt凝血因子11輕鏈抗體包裝100ml
貫葉金絲桃（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Methyl Red sodium salt凝血因子12重鏈抗體包裝25ml
光甘草定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： m-Methyl redFIGNL1蛋白抗體包裝25g
廣東紫株（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： MurexideFAM70A蛋白抗體包裝5g
廣防已（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Murexide含纖維蛋白原C結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體包裝1g
廣藿香（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： methyl violetF-box蛋白相關(guān)蛋白6抗體包裝5g
廣藿香酮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Nitrazine yellow磷酸化成纖維生長(zhǎng)因子受體底物2抗體包裝1g
廣草（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Neutral red椎骨蛋白2抗體包裝25g
廣山楂（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Orange Ⅳ凝血因子VII包裝5g
廣山楂葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： OrangeⅠ凝血因子10抗體包裝1g
廣天仙子（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Patent Blue VF脆性X綜合征相關(guān)蛋白AFF2抗體包裝100mg
廣棗（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Phenolphthalein肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FGGY抗體包裝500mg
龜（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Potassium iodide solution肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白FIG4抗體包裝100ml
鬼臼素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Potassium iodide solution黃素腺嘌呤二核苷酸抗體包裝500ml
NCI-H250細(xì)胞大豆慢生根瘤菌Human COL2(Collagen Type Ⅱ) ELISA KitAlias: COL2(CollagenTypeⅡ)|Chondrocalcin|COL2A1|SEDC|Alpha-1typeIIcollagen|ANFH|AOM|cartilagecollagen|COL11A3|Collagen2|collagenalpha-1(II)chain|collagenII|alpha-1polypeptide|collagentype2ELISAKitReactivity: Human
粘質(zhì)沙雷氏菌Human COL3(Collagen Type Ⅲ) ELISA KitAlias: COL3|COL3A1|EDS4A|COL3A1|EDS4A|alpha1(III)collagen|Collagen3|collagenalpha-1(III)chain|collagen|fetal|collagen|typeIII|alpha1|Collagen-3|EDS4A|Ehlers-DanlossyndrometypeIV|autosomaldominantELISAKitReactivity: Human
藤黃微球菌Human c-myc(c-myc Oncogene Product) ELISA KitAlias: c-myc|Myc|Myc2|Niard|Nird|avianmyelocytomatosisviraloncogenehomolog|BHLHE39|bHLHe39MRTL|ClassEbasichelix-loop-helixprotein39|c-Myc|mycproto-oncogeneprotein|myc-relatedtranslation|localizationregulatoryfactor|Proto-oncogenec-Myc|Transcriptionfactorp64|v-mycavianmyelocytomatosisviraloncogenehomolog|v-mycmyelocytomatosisviraloncogenehomolog(avian)ELISAKitReactivity: Human
毛栓孔菌Human COL4(Collagen Type IV) ELISA KitAlias: COL4|Type-IVCollagenELISAKitReactivity: Human
糙孢籃狀菌Human CMLC-1(Cardiac Myosin Light Chains 1) ELISA KitAlias: CMLC-1|MLC1F|MLC3F|A1catalytic|A2catalytic|fastskeletalmyosinalkalilightchain1|myosin|lightpolypeptide1|alkali|skeletal|fastELISAKitReactivity: Human
Human CNR1(Cannabinoid Receptor 1, Brain) ELISA KitAlias: CNR1|CANN6|CB1|CB1A|CB1K5|CB1R|CB-R|CNR1|SKR6R|CANN6CB1R|cannabinoidreceptor1(brain)|CB1A|CB1K5|CB-RCB1cannabinoidreceptor1|centralcannabinoidreceptor|CNRELISAKitReactivity: Human
大球蓋菇Human CK-13/KRT13(CytokeRatin 13) ELISA KitAlias: CK-13|KRT13|CytokeRatin-13|CK-13|KeRatin-13|K13|KeRatin|typeIcytoskeletal13ELISAKitReactivity: Human
韓國(guó)鞘氨醇單胞菌Human CNTN4(Contactin 4) ELISA KitAlias: CNTN4|Brain-derivedimmunoglobulinsuperfamilyprotein2(BIG-2)|BIG-2|CNTN4|AXCAM|axonal-associatedcelladhesionmolecule|BIG-2Brain-derivedimmunoglobulinsuperfamilyprotein2|contactin4|contactin-4|neuralcelladhesionproteinBIG-2ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。