實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
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HEM細(xì)胞 |
詳見(jiàn)說(shuō)明書(shū) |
FS-X5333 |
產(chǎn)品名稱：黑色素細(xì)胞
來(lái)源：黑色素細(xì)胞
培養(yǎng)基：DMEM
狀態(tài)：貼壁
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
桂皮（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Rosolic acid酰肽受體3抗體（脂氧素A4受體）包裝100g
桂枝（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Rosolic acid兜蛋白抗體包裝25g
哈巴俄苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Sodium oxalate solution for volumetric analysis脂肪堆積和肥胖相關(guān)蛋白抗體包裝500g
哈巴苷(標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thymolblue鳥(niǎo)嘌呤核苷酸交換因子FARP2抗體包裝5g
海風(fēng)藤（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： ThymolblueFK506結(jié)合蛋白相關(guān)蛋白抗體（他克莫司相關(guān)蛋白）包裝1g
海金沙（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Quinaldine Red成纖維生長(zhǎng)因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體包裝25g
?？略碥赵?/span>(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Phenolphthalein鈣粘蛋白家族成員7抗體包裝5g
海龍(尖海龍)（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tetrabromophenol blueⅢ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體包裝1g
海南冬青苷D英文名稱： Thymolphthalein細(xì)絲蛋白A抗體包裝25g
海星（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thorin磷酸化細(xì)絲蛋白A抗體包裝5g
海堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tiron磷酸化細(xì)絲蛋白A抗體包裝1g
亥茅酚苷（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： TironDNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體包裝5g
漢黃芩苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： TBPE磷酸化細(xì)絲蛋白A抗體包裝100g
漢黃芩素(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tropaeolin O磷酸化磷酸神經(jīng)膜抗體包裝25g
漢桃葉（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Zincon磷酸化堿性成纖維生長(zhǎng)因子受體1抗體包裝500g
HEM細(xì)胞*正紅菇Human CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA KitAlias: KRT18|CK-18|CytokeRatin18|KeRatin|typeIcytoskeletal18|KeRatin-18|K18|CellprolifeRation-inducinggene46protein|CytokeRatin-18ELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human CK-20/KRT20(CytokeRatin 20) ELISA KitAlias: CK-20|KRT20|ProteinIT|CytokeRatin-20(CK-20)|KeRatin-20(K20)|KeRatin|typeIcytoskeletal20ELISAKitReactivity: Human
多汁乳菇Human CYP2A6(Cytochrome P450 2A6) ELISA KitAlias: CYP2A6|CytochromeP450(I)|CytochromeP450(I)|CytochromeP450IIA3|CYPIIA6|Coumarin7-hydroxylase|CYP2A3ELISAKitReactivity: Human
淺黃微桿菌Human CYPA(Cyclophilin A) ELISA KitAlias: CYPA|CYPH|PPIA|Rotamase|CyclophilinA|CyclosporinA-bindingprotein|CYPAMGC12404|CYPH|EC5.2.1.8|MGC117158|MGC23397|peptidyl-prolylcis-transisomeraseA|peptidylprolylisomeraseA(cyclophilinA)|PPIaseA|RotamaseA|TcellcyclophilinELISAKitReactivity: Human
榛針孢酵母Human CYPB(Cyclophilin B) ELISA KitAlias: CYPB|CYP-S1|PPIB|S-cyclophilin|SCYLP|CyclophilinB|cyclophilin-likeprotein||CYPBEC5.2.1.8|CYP-S1|MGC2224|OI9MGC14109|peptidyl-prolylcis-transisomeraseB|peptidylprolylisomeraseB(cyclophilinB)|PPIaseB|RotamaseB|S-cyclophilin|SCYLPELISAKitReactivity: Human
腸膜明串珠菌腸膜亞種Human CYSLTR2(Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) ELISA KitAlias: CYSLTR2|CysLTR2|HPN321|G-proteincoupledreceptorGPCR21(hGPCR21)|G-proteincoupledreceptorHG57|PSEC0146|CYSLT2|CYSLT2RELISAKitReactivity: Human
乳桿菌屬Human DGAT1(Diacylglycerol O-acyltransferase 1) ELISA KitAlias: hCG_24006|ARGP1|DGAT|ACATrelatedgeneproduct1|acylcoenzymeA:cholesterolacyltransferaserelatedgene1|diacylglycerolO-acyltransferase1|diglycerideacyltransferase|diacylglycerolO-acyltransferasehomolog1ELISAKitReactivity: Human
副雞嗜血桿菌Human D2R/DRD2(Dopamine Receptor D2) ELISA KitAlias: D2R|DRD2(DopamineReceptorD2)ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。