產(chǎn)品名稱：膜間皮細(xì)胞；MeT-5A
生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)條件：M199+10%FBS+3.3nMEGF+400nMhydrocortisone+870nMInsulin

（氫化可的松）

傳代方法：1：2傳代

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

5-氟胞嘧啶核苷 97%mIgM(Human membrane IgM) ELISA Kit  人表面膜球蛋白M兔骨保護(hù)素(OPG)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鳥嘌呤核苷 99%mIgD(Human membrane IgD) ELISA Kit  人表面膜球蛋白D兔端錨聚合酶1 (TNKS1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

鳥嘌呤核苷 99.5%，用于培養(yǎng)KIR(Human killer cell immnoglobulin-like receptor) ELISA Kit  人殺傷球蛋白樣受體兔軟骨寡聚質(zhì)蛋白(COMP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

次 99%KLR(Human killer cell lectin-like receptor) ELISA Kit  人殺傷凝集素樣受體兔糖原合成酶激酶3α(GSK3α)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

5--2'-脫氧尿苷 99%APC(Human activated protein C) ELISA Kit  人活化蛋白C兔血小板激活因子(PAF)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

肌苷 98%Human Protein C ELISA Kit  人蛋白C兔白介素16(IL-16)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

5-尿苷 99%PF-3(Human plaet factor 3) ELISA Kit  人血小板因子3兔質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

N4-乙酰胞嘧啶 98%F1+2(Human prothrombin fragment 1+2) ELISA kit  人凝血酶原片段F1+2兔Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2(RUNX2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2',3'-異叉腺苷 98%MBP/MBL(Human Mannma binding protein/mannan binding lectin) ELISA Kit  人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素兔輔肌動蛋白α2 (ACTN2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

利巴韋林 98%MAC(Human membrane attack complex) ELISA Kit  人膜攻擊復(fù)合物兔周期素依賴性激酶9(CDK-9)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

1-乙酰-2,3,5-三酰氧-1-beta-D-呋喃核糖 98%EL(Human EuglobulinLysis) ELISA Kit  人優(yōu)球蛋白兔神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白1(NRP1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

β-胸苷 99%f-Hb(Human free haemoglobin) ELISA Kit  人游離血紅蛋白兔相關(guān)血漿蛋白2(PAPPA2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

四乙酰核糖 98%PRM1(Human Protamine 1) ELISA Kit  人魚精蛋白1兔L氨解氨酶(PAL)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

阿糖尿苷 98%HbCO(Human carboxyhemoglobin) ELISA Kit  人一氧化碳血紅蛋白兔中期因子(MK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

尿嘧啶 99%PAIg(Human plaet-associated immunoglobulins) ELISA Kit  人血小板相關(guān)球蛋白兔接觸蛋白2(CNTN2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
MeT-5A細(xì)胞脂蛋白相關(guān)脂酶A2Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗羊IgMNKA  神經(jīng)激肽A抗體

降解加速因子Elisa試劑盒辣根過氧化物酶標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNK-2R  神經(jīng)激肽A受體/K物質(zhì)受體抗體

血小板特異性抗原Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNitrotyrosine  硝酪氨抗體

抗胰蛋白酶Elisa試劑盒生物素標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNIT2  NIT2蛋白抗體

誘導(dǎo)型NO合酶Elisa試劑盒Cy3標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNIT1  水解酶1抗體

犬尿喹啉Elisa試劑盒Cy5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNIS  鈉轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體

Ras相關(guān)C3肉素底物1Elisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNIRF/RNF107  環(huán)指蛋白107抗體

肽-主要組織相容性復(fù)合體復(fù)合物Elisa試劑盒Cy7標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNIR2  膜脂轉(zhuǎn)移蛋白1抗體

跨膜絲氨蛋白143Elisa試劑盒PE標(biāo)記的兔抗豚鼠IgGNIR1/RDGBA3  膜相關(guān)脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體