實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：胚肺成纖維細(xì)胞；WI-38
形態(tài)特性：成纖維細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：LeonardHayflick建系；有限傳代細(xì)胞系；壽命為50±10代（倍增時(shí)間24h）；來(lái)自妊娠3個(gè)月的正常胚胎肺組織。該細(xì)胞系是個(gè)用于人疫苗制備的人二倍體細(xì)胞；培養(yǎng)基中添加TNFα可以加快細(xì)胞生長(zhǎng)。

培養(yǎng)條件：MEM(高糖）+10%FBS

傳代方法：1:2~1:4傳代；2~3天換液1次

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
螺旋霉素 分析標(biāo)準(zhǔn)品pFN(Human Plasma fibronectin) ELISA kit  人血漿纖維連接蛋白兔神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3(NT-3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

螺旋霉素 BCcFn(Human cellular fibronectin) ELISA kit  人纖維連接蛋白兔殺性/通透性增加蛋白(BPI)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

5-氮胞苷 98%TPS(Human Total protein S) ELISA Kit  人總蛋白S兔外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

6-鳥嘌呤核苷 97%SDPR(human serum deprivation response) ELISA Kit  人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白兔蛋白二硫化物異構(gòu)酶A6(PDIA6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

5-氮胞嘧啶 98%HNP1-3(Human neutrophil peptide 1-3) ELISA Kit  防御素1-3兔血小板膜糖蛋白IV (GP4/CD36)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

核苷5’-一腺苷鈉鹽 99%ECP(Human eosinophil cationic protein) ELISA Kit  人嗜性粒陽(yáng)離子蛋白兔線粒體超氧化物歧化酶2(SOD2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

腺嘌呤 98%PS(Human plasma anticoagulant protein S) ELISA Kit  人血漿抗凝蛋白S兔G蛋白偶聯(lián)受體120(GPR120)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

腺嘌呤 ≥99.5% (HPLC)PC(Human plasma anticoagulant protein C) ELISA Kit  人血漿抗凝蛋白C兔固酮(ALD)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

腺嘌呤核苷 用于培養(yǎng)，>99.5%(HPLC)Fc Gamma(Human Fc region of immunoglobulin G) ELISA Kit  人球蛋白G Fc片段兔載脂蛋白E(ApoE)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

腺嘌呤核苷  分析標(biāo)準(zhǔn)品CyPB(Human cyclophilin B) ELISA Kit  人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B兔血小板反應(yīng)蛋白4(TSP-4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

腺嘌呤核苷 超純級(jí)，99.5%C4BP(Human C4 binding protein) ELISA Kit  人C4結(jié)合蛋白兔間變性瘤激酶(ALK)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

腺嘌呤核苷 BC，99%C3c(Human Complement fragment 3c) ELISA Kit  人補(bǔ)體片段3c兔脫氫酶B(LDHB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

腺嘌呤鹽 99%C7(Human Complement fragment 3c0 ELISA Kit  人補(bǔ)體7兔唾液淀粉酶α1(AMY1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硫腺嘌呤 用于培養(yǎng)，98%A Beta1-42(Human amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit  人β淀粉樣蛋白1-42兔角膜蛋白(KERA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硫腺嘌呤 98%（HPLC）Human chemerin ELISA Kit   人chemerin兔β淀粉樣前體蛋白(βAPP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
WI-38細(xì)胞DNA聚合酶βElisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgGNMDA-NR1/NR1/NMDAR1  天冬氨受體抗體

組織蛋白酶BElisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的兔抗羊IgGNm23-H2  腫瘤抑制因抗體

多巴轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的兔抗羊IgGNm23/NME1/NME2  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因抗體

抗肌內(nèi)膜IgG抗體Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的兔抗羊IgGNLRX1/NOD26/NOD9  膜內(nèi)在蛋白NOD26抗體

西尼羅病IgM抗體Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的兔抗羊IgMNLRP9  富含亮氨重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體

孔肯亞IgM抗體Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的兔抗羊IgMNLRP7  富含亮氨重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體

孔肯亞IgG抗體Elisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的兔抗羊IgMNLRP10  富含亮氨重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體

Twist相關(guān)蛋白2Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的兔抗羊IgMNLK/Nemo-like kinase  Nemo樣激酶抗體

自身性腦炎抗體Elisa試劑盒Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgMNLGN4Y  神經(jīng)元Y連鎖蛋白抗體（兒童自閉癥相關(guān)蛋白）
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。