冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

產(chǎn)品名稱(chēng)：非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞；NCI-H358
形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：1981年從一位開(kāi)始化療之前的患者的腫瘤組織中分離建株。超微結(jié)構(gòu)研究表明細(xì)胞質(zhì)中有Clara細(xì)胞的特征結(jié)構(gòu)細(xì)胞表達(dá)主要的肺表面結(jié)合蛋白SP-A的蛋白和RNA。不表達(dá)SP-B和SP-C。他們?cè)谲洯傊械目寺⌒纬尚蕿?.83%。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法：消化CQ-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿(mǎn)。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢(shì)：

1.具有多年的銷(xiāo)售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量?jī)?yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長(zhǎng)期的合作關(guān)系；

2.公司不僅與各大高校、科研機(jī)構(gòu)以及**性企業(yè)有著合作關(guān)系，還與國(guó)際接軌，我司代理多種知名的國(guó)際品牌，如ATCC、DSMZ、Millipore、Abcam,Serva、Pharmacia、eBioscience,Santa，Abnova，GenWay等。

相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：

2-脫氧-D-核糖 98%POMC(Human pro-opiomelanocortin) ELISA Kit  人阿黑皮素原兔白調(diào)節(jié)素(LR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

5-氟-2'-脫氧尿苷 99%ADMA(Human asymmetrical dimethylarginine) ELISA Kit  人不對(duì)稱(chēng)二精氨兔肥大類(lèi)胰蛋白酶(MCT)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

D-核糖 ≥99%（HPLC)ST(Human Serotonin) ELISA Kit  人血清素/血清兔髓鞘型脂肪結(jié)合蛋白(FABP8)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,6-二 98%CTX(Human cytotoxin) ELISA Kit  人素兔雷帕霉素靶蛋白(mTOR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,6-二 99%Alpha-SYN(Human Alpha-Synuclein) ELISA Kit  人α突觸核蛋白兔葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

2,6-二  98%CA19-9(Human Carbohydrate antigen19-9) ELISA Kit  人糖鏈抗原19-9兔紐蛋白(VCL)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

酮 40%溶液HRD(Human Hirudin) ELISA Kit  人水蛭素兔色素b-561(CYB561)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

酮 32%溶液Human Tacrolimus-FK506 ELISA Kit  人他克莫司兔信號(hào)素3B (SEMA3B)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

4-咪唑 98%ESA(Human epithelial specific antigen) ELISA Kit  人上皮特異性抗原兔神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

3-(4-吡啶)-D-氨 98%EMA(Human Epithelial membrane antigen) ELISA Kit  人上皮膜抗原兔新生狀腺素(Neo-T4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

Boc-3-(2-萘)-D-氨 99%CLU(Human clusterin) ELISA Kit  人凝聚素兔抗壁抗體(TA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

L-4-氨 98%OJ/IleRS(Human anti-OJ-antibody) ELISA Kit  人OJ抗體/抗異亮氨酰tRNA合成酶抗體兔胚外胚層發(fā)育蛋白(EED)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

吡咯-2- 99%ACA/CENP(Human Anticentromere Antibody) ELISA Kit  人抗著絲點(diǎn)抗體兔信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子3(STAT3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

α--L-氨 98%MYOG(Human myogenin) ELISA Kit  人肌**素兔B活化因子受體(BAFFR)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

D-3-三氟氨  97%ASP(Human antibody to group A streptococcal polysaccharide) ELISA Kit  人A組鏈球壁多糖抗體兔尿激酶型纖溶酶原激活因子(PLAU/uPA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
NCI-H358細(xì)胞序列相似家族3成員BElisa試劑盒膠體金標(biāo)記的兔抗雞IgMNPHS2/Podocin  腎小球裂孔膜蛋白PDCN抗體

蛋白水解誘導(dǎo)因子;皮離蛋白Elisa試劑盒辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的兔抗雞IgMNPFF/FMRFamide  痛覺(jué)調(diào)節(jié)肽NPFF抗體

纖維蛋白原IgG抗體Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的兔抗雞IgMNPD014  1號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框63抗體

纖維蛋白原IgM抗體Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的兔抗雞IgMNPC1/Niemann Pick C1  尼曼匹克C1前體蛋白抗體

纖維蛋白原IgA抗體Elisa試劑盒Cy3標(biāo)記的兔抗雞IgMNPAP1  核孔蛋白1抗體

泰勒蟲(chóng)抗體Elisa試劑盒Cy5標(biāo)記的兔抗雞IgMNOXA2/p67phox  NADPH氧化酶活化蛋白1抗體

谷胱甘肽過(guò)氧化酶Elisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgMNoxa  Noxa蛋白抗體

甘露糖結(jié)合蛋白2Elisa試劑盒Cy7標(biāo)記的兔抗雞IgMNOX5  還原型輔酶Ⅱ氧化酶5/煙酰腺嘌呤二核苷抗體

L-色氨Elisa試劑盒PE標(biāo)記的兔抗雞IgMNOX4/NADPH oxidase 4  NADPH氧化酶NOX家族的成員4抗體
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。