實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：該細(xì)胞角蛋白陽(yáng)性；表達(dá)CA-A、堿性磷酸酶；與HRT-18為同一細(xì)胞。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法:1:3傳代，2-3天換液一次

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書(shū)、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類(lèi)。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。 
鋁箔袋,350*450*0.1AC-1(Human adenylyl cyclase 1) ELISA Kit  人腺苷環(huán)化酶1兔單核趨化蛋白1(MCP-1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋁箔袋 380*180 mmsAC(Human Soluble Adenylate Cyclase) ELISA Kit  人可溶性腺苷環(huán)化酶兔胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6(IGFBP-6)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋁箔袋 220*150 mmODC(Human Ornithine decarboxylase) ELISA Kit  人鳥(niǎo)氨脫羧酶兔抗?fàn)钕偾虻鞍卓贵w(ATGA/TGAB)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋁箔袋 160*100 mmPTK/CD115(Human protein tyrosine kinase) ELISA Kit  人蛋白酪氨激酶兔補(bǔ)體片斷5b(C5b)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

二月桂二丁錫 95%PTP/PTPase/CD148(Human protein tyrosine phosphatase) ELISA Kit  人蛋白酪氨酶兔衰變加速因子(DAF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

γ-縮水甘油氧氧硅烷 97%TACE(Human TNF Alpha converting enzyme) ELISA Kit  人腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶兔BCL2修飾因子(BMF)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

六二硅氧烷 99%PMN Elastase(Human Polymorphonuclear Elastase) ELISA Kit  人多形核白彈性蛋白酶兔Bcl2關(guān)聯(lián)永生因3(BAG3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

六二硅烷 AR，98%uPA/PLAU(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit  人尿激酶型纖溶酶原激活物兔叉頭框蛋白P3(FOXP3)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三乙氧硅烷 98%KLK 8(Human urokinase-type plasminogen activator) ELISA Kit  人激肽釋放酶8兔嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CYPA)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

四氧硅烷 97%KLK 6(Human Kallikrein 6) ELISA Kit  人激肽釋放酶6兔天青殺素1(AZU1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒  

氧硅烷 98%FDA(Human Fructose-1,6-bisphosphate aldolase) ELISA Kit  人果糖1,6二縮酶兔抑制蛋白β1(ARRβ1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

四氧硅烷 98%cath-D(Human cathepsin D) ELISA Kit  人組織蛋白酶D兔早老素2(PS2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

硅四乙酯 99.999% metals basisHSL(Human hormone sensitive lipase) ELISA Kit  人敏感性脂肪酶兔蛋白酶1調(diào)控亞1A(PPP1R1A)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三乙酰氧硅烷 90%PK(Human pancreatickininogenase) ELISA Kit  人胰激肽原酶兔胸腎表達(dá)趨化因子(BRAK/CXCL14)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

三乙硅烷 98%ACO-2(Human aconitase 2) ELISA Kit  人烏頭酶2兔間隙連接蛋白β1(GJβ1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
結(jié)腸癌細(xì)胞；HCT-8鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白IgM抗體Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgGP311 protein  神經(jīng)再生相關(guān)蛋白抗體

MEK1;2激酶Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgGP2Y4  P2Y4受體抗體

RAD51同源物Elisa試劑盒FITC標(biāo)記的小鼠抗兔IgMP2Y2  嘌呤ATP受體抗體

X-射線修復(fù)交叉互補(bǔ)蛋白6Elisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗兔IgMP2Y1R/P2ry1  P2Y1受體抗體/嘌呤受體抗體

乙酰膽堿酯酶Elisa試劑盒膠體金標(biāo)記的小鼠抗兔IgMP2X2/ATP receptor  嘌呤受體P2X2抗體

凝血因子ⅥElisa試劑盒生物素標(biāo)記的小鼠抗兔IgMP2RX4  三腺苷門(mén)控陽(yáng)離子通道蛋白抗體

諾瓦克病Elisa試劑盒Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgMP2RX3/ATP receptor  嘌呤受體P2X3抗體

可溶性白介素2受體aElisa試劑盒Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgMp22-phox/Cytochrome b245 Light Chain  色素b245輕鏈抗體

羥戊激酶Elisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgMP21/CDKN1A  p21蛋白抗體
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。