冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí)， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

形態(tài)特性：上皮樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

特征特性：該細(xì)胞是1964年由FoghJ用移植培養(yǎng)方法和含15%FBS的F12培養(yǎng)液從原發(fā)性腫瘤分離的。近來(lái)，已建株的培養(yǎng)細(xì)胞用含血清的McCoy＇s5a培養(yǎng)基培養(yǎng)。該細(xì)胞系在裸鼠中成瘤，也能在類(lèi)固醇處理的地鼠中成瘤。該細(xì)胞可合成IgA、CA-A、TGFβ結(jié)合蛋白和黏液素；表達(dá)尿激酶受體，但沒(méi)有檢測(cè)到血漿酶原活性；不表達(dá)CD4，但細(xì)胞表面表達(dá)半乳糖神經(jīng)酰胺（HIV的可能替代受體）。該細(xì)胞系癌基因CS-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis、fos陽(yáng)

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類(lèi)；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

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相關(guān)熱銷(xiāo)產(chǎn)品：

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3-二氧硅烷 97%IDUA(Human Alpha-L-iduronidase) ELISA Kit  人αL艾杜糖苷酶兔果糖二縮酶C(ALDOC)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

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鋁 CPALD(Human Aldolase) ELISA Kit  人縮酶兔Rho家族GTP酶1(RND1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

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三化鈦(III) ARASM(Human acid sphingomyelinase) ELISA Kit  人性神經(jīng)鞘脂酶兔轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR/CD71)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋁箔袋,220*350*0.1ALOX-5(Human arachidonate 5-lipoxygenase) ELISA Kit  人花生四烯5脂加氧酶兔肝配蛋白A4 (EFNA4)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒

鋁箔袋,350*500*0.15-LO/LOX(Human 5-lipoxygenase) ELISA Kit  人5脂加氧酶兔三葉因子2(TFF2)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒
結(jié)腸癌細(xì)胞；HT-29突觸囊泡蛋白ⅦElisa試劑盒辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗兔IgGp53 (FL-393)  腫瘤抑制因p53抗體

可溶性腺苷環(huán)化酶Elisa試劑盒Cy7標(biāo)記的小鼠抗兔IgG?p53 (DO-1)  腫瘤抑制因p53抗體

DFGFElisa試劑盒PE標(biāo)記的小鼠抗兔IgGP4HB  蛋白二硫鍵異構(gòu)酶P4HB抗體

ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體B1Elisa試劑盒PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgGp47-phox  NADPH氧化酶活化蛋白p47抗體

1-氨環(huán)烷-1-羧Elisa試劑盒APC標(biāo)記的小鼠抗兔IgGP45017A1/Cytochrome P450 17A1  色素C P450 17A1抗體

1-氨環(huán)烷-1-羧Elisa試劑盒Cy5標(biāo)記的小鼠抗兔IgGP450 1A2/CYP1A2  色素P450 1A2抗體

化tau—199蛋白Elisa試劑盒PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗兔IgGp400  p400蛋白抗體

化tau—231蛋白Elisa試劑盒堿性酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗兔IgGp38MAPK/MAPK14/p38Alpha  絲裂原活化蛋白激酶p38α抗體

鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白IgG抗體Elisa試劑盒羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgGP38 MAPK(Phospho-Thr180/Tyr182)  化-絲裂原活化蛋白激酶p38抗體（P-p38 MAPK）
細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)控、檢測(cè)甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類(lèi)型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究?jī)?nèi)容便于觀察、檢測(cè)和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。