實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

生長特性：半貼壁生長

特征特性：該細(xì)胞1984年建系，源自一位33歲患有大腸腺癌男性經(jīng)5-fu**后的腹水。

培養(yǎng)條件：RPMI1640+10%FBS

傳代方法:1:2。3天內(nèi)可長滿。

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
S-(-)-吲哚啉-2-羧 99%OxLDL(Human oxidized lowdensity lipoprotein) ELISA Kit  人氧化低密度脂蛋白兔早期生長應(yīng)答蛋白2(EGR2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

(2S,3aS,7aS)-2-羧八氫吲哚 98%MPIF-1/CCL23(Human Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 1) ELISA Kit  人骨髓抑制因子1兔肌鈣蛋白I(Tn-I)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

2- 97%ADP(Human adiponectin) ELISA Kit  人脂聯(lián)素兔周期素依賴性激酶2(CDK2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

烯鈉 99%HIS(Human Histamine) ELISA KIT  人組兔富含半胱氨型性蛋白(SPARC)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧乙 分析標(biāo)準(zhǔn)品Human Resistin ELISA KIT   人抵抗素兔氨氨肽酶(AAP)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氧乙 98%ALP-B(Human Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit  人骨特異性堿性酶B兔核孔蛋白85kda(NUP85)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

 CP，98.0%（劇品）OT/BGP(Human Osteocalcin/Bone gla protein) ELISA kit  人骨鈣素/骨谷氨蛋白兔角蛋白19(CK-19/KRT19)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

 AR，99.0%（劇品）sRANKL(Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand) ELISA Kit  人可溶性核因子κB受體活化因子配兔XI型膠原α1(COL11α1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

乙二  >99% (GC)1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit  人1,25二羥維生素D3兔抗凝血酶(AT)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

蘇丹藍(lán)II 高純級，97%Human histon-H2b ELISA Kit  人組蛋白H2b兔雌誘導(dǎo)蛋白PS2 (EIPS2)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

蘇丹藍(lán)II Biological stainOPG(Human Osteoprotegerin) ELISA KIT  人骨保護(hù)素兔化腺苷活化蛋白激酶(AMPK)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

蘇丹藍(lán)II 分析標(biāo)準(zhǔn)品BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體Ⅱ兔黑素瘤抑制性活性蛋白1(MIA1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒  

重膽堿 98%BMPR-1A(Human Bone morphogenetic protein receptor 1A) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體1A兔骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

氫 AR，99%BMP-4(Human Bone morphogenetic protein 4) ELISA Ki  人骨成型蛋白4兔孕酮受體(PGR)酶聯(lián)吸附測定試劑盒

銻 AR,99.5%BMP-2(Human Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit  人骨成型蛋白2兔蛋白激酶Cα相互作用蛋白α1(PICK1)酶聯(lián)吸附測定試劑盒
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞；COLO320HSR序列相似家族19成員A5Elisa試劑盒Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgGPatched/PTCH  Patched/PTCH抗體

肽脯氨順反異構(gòu)酶Elisa試劑盒Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgGPASK/STK39  絲氨/蘇氨蛋白激酶39抗體

肽脯氨順反異構(gòu)酶Elisa試劑盒PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgGPAS1C1  核纖層蛋白A相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白1抗體

骨髓源性生長因子Elisa試劑盒PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgGParvalbumin  細(xì)小清蛋白抗體

EB病早期抗原Elisa試劑盒Cy3標(biāo)記的羊抗人IgGPARP4  多腺苷二多聚酶4抗體/多聚ADP-核糖聚合酶4

EB病核心抗原Elisa試劑盒Cy5標(biāo)記的羊抗人IgGPARP3  多腺苷二多聚酶3抗體/多聚ADP-核糖聚合酶3

賴氨特異性脫酶5AElisa試劑盒Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgGPARP16  多腺苷二多聚酶16抗體

β-葡萄糖苷酶Elisa試劑盒PE-Cy3標(biāo)記的羊抗人IgGPARP (N-Terminus)  多腺苷二多聚酶抗體(N端)

血清粘蛋白Elisa試劑盒PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgGPARP  多腺苷二多聚酶抗體/多聚ADP-核糖聚合酶1
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。