熒光定量PCR試劑盒注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時(shí)間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在學(xué)中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
大腸埃希菌轉(zhuǎn)導(dǎo)β樣蛋白1抗體Anti-IL18 Antibody糖磺基轉(zhuǎn)移酶1(CHST1)ELISA試劑盒
土壤德沃斯氏菌絲氨酸/蘇氨酸激酶TLK2抗體Anti-IL18 Antibody糖合酶3(CHSY3)ELISA試劑盒
居硫氧環(huán)蛋白還原酶1抗體Anti-IL1B Antibody糖合酶1(CHSY1)ELISA試劑盒
Compostimonas跨膜蛋白173抗體Anti-IL18 Antibody糖蛋白M6B(GPM6B)ELISA試劑盒
大腸埃希氏桿菌跨膜蛋白147抗體Anti-IL18 Antibody(PB0057)糖蛋白M6A(GPM6A)ELISA試劑盒
諾卡氏菌Ten-eleven轉(zhuǎn)運(yùn)基因1蛋白抗體Anti-IL18 Antibody糖蛋白A33(GPA33)ELISA試劑盒
矩圓黑盤孢四分子交聯(lián)體5抗體(四旋蛋白)Anti-IL18 Antibody糖蛋白Ⅴ(GP5)ELISA試劑盒
銅綠假單胞菌四分子交聯(lián)體6抗體(四旋蛋白)Anti-IL18 Antibody羰基還原酶4(CBR4)ELISA試劑盒
淀粉酶產(chǎn)色鏈霉菌T急性母白血病相關(guān)抗原1抗體Anti-IL1B Antibody羰基還原酶3(CBR3)ELISA試劑盒
Bacillus aryabhattaiTM4SF3蛋白抗體Anti-IL1B Antibody羰基還原酶1(CBR1)ELISA試劑盒
猴頭四分子交聯(lián)體10抗體(四旋蛋白)Anti-IL1B Antibody碳酸酐酶Ⅻ(CA12)ELISA試劑盒
黃曲霉四分子交聯(lián)體9/四旋蛋白抗體Anti-IL1B Antibody碳酸酐酶Ⅸ(CA9)ELISA試劑盒
蘇云金芽孢桿菌四分子交聯(lián)體12抗體(四旋蛋白)Anti-IL1R1 Antibody碳酸酐酶Ⅵ(CA6)ELISA試劑盒
傘形卷霉四分子交聯(lián)體13抗體(四旋蛋白)Anti-IL1RN Antibody碳酸酐酶ⅤB(CA5B)ELISA試劑盒
日本根霉四分子交聯(lián)體16抗體(四旋蛋白)Anti-IL1F10 Antibody碳酸酐酶Ⅳ(CA4)ELISA試劑盒
多主棒孢霉四分子交聯(lián)體20抗體(四旋蛋白)Anti-IL1F10 Antibody碳酸酐酶Ⅲ(CA3)ELISA試劑盒
熒光定量PCR試劑盒人血管內(nèi)皮生長因子受體1(VEGFR1/FLT1)酶聯(lián)附測定試劑盒Human HERC5 ELISA KitBTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白1(型肝炎病的NS5A反轉(zhuǎn)錄蛋白8)抗體
人表睪酮(ET)酶試劑盒Human HESX1 ELISA KitBCL7B蛋白抗體
人酮酸激酶M2型同工酶(PKM2)酶Human HES5 ELISA Kit堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體
人酮酸脫氫酶E1(PDH E1)酶定試劑盒Human HECTD1 ELISA KitB白血病/瘤蛋白7抗體
人酮酸脫氫酶α(PDHα)酶聯(lián)定試劑盒Human HEXA ELISA Kit先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體(常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17)
人酮酸脫氫酶激酶同工酶4(PDK4)酶聯(lián)附測定試劑盒Human HECTD2 ELISA KitB遷移基因1抗體
人酮酸脫氫酶磷酸酶(PDP)酶試劑盒Human HECTD3 ELISA Kit脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白BEAN1抗體
公司即用型PCR試劑盒:
是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng),具有廣泛的用途。
1. 方便,用戶只需準(zhǔn)備模板和引物既可以進(jìn)行PCR 實(shí)驗(yàn)。
2. 快捷,操作步驟已經(jīng)限度地簡化,能減少污染,降低實(shí)驗(yàn)誤差。
3. 本產(chǎn)品A 型含電泳染料,PCR 反應(yīng)液可直接上樣電泳,進(jìn)一步簡化了操作。
4. 由于各成分的濃度和比例都經(jīng)過精心優(yōu)化,反應(yīng)的靈敏度高,特異性強(qiáng)。能擴(kuò)增各種常見的DNA 樣品。
5. 產(chǎn)物可直接用于T 載體克隆,不需要額外的加A 反應(yīng)。
使用及效果:將本產(chǎn)品15 μL 與用戶自備的模板,引物和水共15 μL 混合后,直接進(jìn)行PCR反應(yīng)(PCR 參數(shù)由用戶自己確定),反應(yīng)結(jié)束后直接取10 μL 電泳檢查擴(kuò)增結(jié)果。