實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)； 

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說(shuō)明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說(shuō)明。
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。 

白介素1受體相關(guān)激酶1(IRAK1)ELISA試劑盒鹽酸吡哆 99%4，4'-二（9-咔唑）聯(lián)苯 98%磷酸氫鈣二水(>98%,BR)

白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒1,4-哌二乙磺酸二鈉鹽 BC2,5-二(氯甲基)- 1-甲氧基-4- (2-乙基已氧基)-苯 98%碳酸鈰

白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒1,4-哌二乙磺酸倍半鈉鹽 99%2-溴-9-芴酮 96%胰凝乳蛋白酶原 A

白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒并五苯 98%9,9-二辛基-2,7-二溴基芴 97%汽巴藍(lán)

白介素1β轉(zhuǎn)換酶(ICE)ELISA試劑盒 對(duì)磷酸二鈉 六水合物 培養(yǎng)級(jí), ≥98%9,9-二己基-2,7-二溴芴 97%DEAE葡聚糖

白介素1β前體(Pro-IL-1β)ELISA試劑盒對(duì)磷酸二鈉 for enzyme immunoassay,≥99.0%3-癸基噻吩 98%氟啶酮(>98%,植物級(jí))

白介素1β前體(pro-IL1B)ELISA試劑盒鈉 AR，98.0% 9，9-二甲基-2，7-二溴芴 98%組(>98%,BC)

白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒磺二甲氧嘧啶 98%2,7-二溴芴 98%海

白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒D-(+)-海藻糖 二水合物  from Saccharomyces cerevisiae, ≥99%2,6-二甲基-γ-吡喃酮 99%麥芽磷酸化酶, 硫酸銨懸浮液

白介素1Rα(IL-1Rα)ELISA試劑盒三(羥甲基)甲基甘氨酸 99%2,7-二溴芴酮 96%草酮(>95%,植物級(jí))

白介素19(IL-19)ELISA試劑盒三(羥甲基)甲基甘氨酸 99.5%2,6-二甲基-4H-4-亞吡喃基二 98%4-甲基傘形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷

白介素18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯 98%3-己基噻吩 98%粘酸(>98%，BC)

白介素18(IL-18)ELISA試劑盒3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯 ≥99%(HPLC)2-甲氧基-5-(2′-乙基已氧基)對(duì)苯二甲 98%N,N-二乙基對(duì)苯二硫酸鹽

白介素17F(IL-17F)ELISA試劑盒3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯 standard for GC, ≥99.0% (GC)N,N′-二苯基-N,N′-(1-萘基)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二（NPD） 99.萘酚AS-MX磷酸酯(>98%，BC)

白介素17B(IL17B)ELISA試劑盒Tris乙磺酸 99%3-辛基噻吩 98%苯肼(>98%,BC)

白介素17A(IL-17A)ELISA試劑盒三(羥甲基)氨烷鹽酸鹽 99%6,13-五并苯醌 99%硫酸氫(> 99%，BC)
大鼠角質(zhì)形成細(xì)胞蘇云金芽胞桿菌

種屬: Bacillus│thuringiensis

分離基物: 1-5cm土壤

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 科研研究

培養(yǎng)基: 0002

烏斯懷亞海單胞菌

種屬: Marinomonas│ushuaiensis

分離基物: 水樣/近海海水

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: yes

應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株

培養(yǎng)基: 471
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說(shuō)明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來(lái)。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。