實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺； 

公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。 

成纖維生長因子21(FGF21/UNQ3115/PRO10196)ELISA試劑盒纖維素粉 粒徑：25μmN-甲基吡咯烷酮 電子級,99.9%3,5-二甲酸(>98%,BR)

成纖維生長因子2(FGF2/bFGF)ELISA試劑盒纖維素粉 粒徑：190μmN-甲基吡咯烷酮（NMP） standard for GC, ≥99.9%(GC)40%乙溶液

成纖維生長因子13(FGF-13)ELISA試劑盒羧甲基淀粉鈉 藥用級N-甲基吡咯烷酮  >99.5% (GC)硫酸鈣(>99%,BR)

成纖維生長因子10(FGF10)ELISA試劑盒磷酸氫鈣 AR，99.0 %N-甲基吡咯烷酮 用于多肽合成, ≥99.5% (GC)硝酸鈷六水(>98.0-102.0%,BR)

成熟促進因子(MPF)ELISA試劑盒磷酸氫鈣，二水 Ph. Eur., BP, USP, 98-102.5% N-甲基吡咯烷酮 分析標準品二環(huán)己基碳二亞(>99%,BR)

成骨生長肽(OGP)ELISA試劑盒羥基纖維素 2%粘度6mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%膽紅素 98%鹽酸鑭六水(>99%,BR)

巢蛋白1(NID1)ELISA試劑盒羥基纖維素 2%粘度15mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%苯甲酸丁酯 99%三氧化鉬(>98%,BR)

超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒羥基纖維素 2%粘度50mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%1-氯-9，10-二苯乙炔基蒽 97%氯化鎳六水(>98%,BC)

超敏游離雌三(uE3)ELISA試劑盒羥基纖維素 2%粘度3mPa.s;甲氧基28-30%;羥基7.0-12%1，8-二氯-9，10-二苯乙炔基蒽 90%木瓜蛋白酶懸浮液

超敏生長(U S-GH)ELISA試劑盒3-羧基環(huán)丁 98%六甲磷酰三 98%苯磺酸鈉(>98%，BR)

超敏熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽 97%四烷絡合物 1M solution in THF過氧化物歧化酶(SOD)

超敏熱休克蛋白60(HSP-60)ELISA試劑盒1-二苯甲基-3-羥基氮雜環(huán)丁烷鹽酸鹽 96%2-乙烯吡啶 97%四正丁基溴化銨(>98%,BC)

超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)ELISA試劑盒二苯 97%琥珀酸二甲酯 AR，99%三十烷(>98%,植物級)

超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒苯并呋喃酮 98%富馬酸二乙酯 98%4-羥基苯甲(>98.0%，BR)

超磷酸化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)ELISA試劑盒二苯烷 99%馬來酸二甲酯 98%低內(nèi)素牛血清白蛋白

腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒2-羥基 99%酸甲酯 Standard for GC, ≥99.5% (GC)梭菌蛋白酶
大鼠腹腔主動脈平滑肌細胞假腸膜明串珠菌

種屬: Leuconostoc│pseudomesenteroides

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 0033

生長條件: 26℃

存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法

藤黃紫假交替單胞菌

種屬: Pseudoalteromonas│luteoviolacea

提供形式: 凍干物

**等級: 1

模式菌株: yes

應用領域: 模式菌株

培養(yǎng)基: 0223

生長條件: 26℃
培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。