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PCR的特異性影響因素供參考

日期:2025-01-03 08:32
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摘要: 許多因素可以影響PCR的特異性,在此我們作一歸納,供大家參考: 1、退火步驟的嚴(yán)格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。 2、減短退火時(shí)間及延伸時(shí)間可以減少錯(cuò)誤引發(fā)及錯(cuò)誤延伸。 3、引物二聚體是常見(jiàn)的副產(chǎn)品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯(cuò)誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。 4、改變mgcl2(有時(shí)kcl)濃度可以改進(jìn)特異性,這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對(duì)taq酶的直接作用。 一般認(rèn)為PCR產(chǎn)物應(yīng)在48h以內(nèi)完成電泳檢測(cè),有些好于當(dāng)日電泳檢測(cè),大于48h后帶型就會(huì)出現(xiàn)不規(guī)則,甚至...

許多因素可以影響PCR的特異性,在此我們作一歸納,供大家參考:

1、退火步驟的嚴(yán)格性:提高退火溫度可以減少不匹配的雜交,從而提高特異性。

2、減短退火時(shí)間及延伸時(shí)間可以減少錯(cuò)誤引發(fā)及錯(cuò)誤延伸。

3、引物二聚體是常見(jiàn)的副產(chǎn)品,降低引物及酶的濃度也可以減少錯(cuò)誤引發(fā),尤其是引物的二聚化。

4、改變mgcl2(有時(shí)kcl)濃度可以改進(jìn)特異性,這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對(duì)taq酶的直接作用。

一般認(rèn)為PCR產(chǎn)物應(yīng)在48h以內(nèi)完成電泳檢測(cè),有些好于當(dāng)日電泳檢測(cè),大于48h后帶型就會(huì)出現(xiàn)不規(guī)則,甚至消失。