ELISA外源性干擾因素包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì) 菌污染、標(biāo)本保存時間過長和標(biāo)本凝固不全等。

1、標(biāo)本的溶血血紅蛋白中含鐵血紅素有類過氧化物酶的活性，因此，在以辣根過氧化物酶(HRP)為標(biāo)志的ELISA測定中，如血清樣本中血紅蛋白濃度較高，則很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。所以在采血時應(yīng)注意手法，采集的血液勿用力振蕩，嚴(yán)防標(biāo)本溶血。

2、標(biāo)本的污染菌體可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶，可使實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)非特異性顯色。因此，ELISA檢測宜采集新鮮標(biāo)本，如不能當(dāng)時測定，5 d之內(nèi)應(yīng)4℃保存，1周后檢測應(yīng)低溫凍存；同時，收集標(biāo)本采用無菌試管，可防止標(biāo)本的污染。

3、標(biāo)本的保存標(biāo)本在冰箱中保存過久，血清中IgG可聚合成多聚體，AFP可形成二聚體，在用間接法測定中會導(dǎo)致本底過深，甚至造成假陽性。 冰凍保存的標(biāo)本反復(fù)凍融產(chǎn)生機(jī)械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子有破壞作用，可引起假陰性結(jié)果。因此，ELISA檢測盡量采用新鮮標(biāo)本，長時凍存的樣本避免反復(fù)融凍。

4、標(biāo)本凝固不全凝固不全的血清中含有部分纖維蛋白原，可使結(jié)果呈假陽性。解決的方法有：

①于采血管中加入適當(dāng)?shù)目鼓齽?

②將采集后的血液放在架子上再放入37℃水浴中1 h，待充分凝固后再離心分離血清。