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WB封閉液的選用要求
日期：2025-01-08 02:26
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摘要：
封閉是Western Blot 至關(guān)重要的一部分， 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合，為成功的WB奠定基礎(chǔ)。雖然這個(gè)步驟操作簡(jiǎn)單，但是封閉液的選擇確是很多科研人員的難題。為了讓大家更方便的選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的封閉液，這里介紹6種常見(jiàn)不同的封閉液，以及它們的優(yōu)缺點(diǎn)。
封閉液的選用要求：
1、常用封閉液為脫脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、無(wú)蛋白封閉液等。
2、封閉液濃度：封閉時(shí)一般用5%脫脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%無(wú)蛋白封閉液；配制二抗稀釋液一般為1-5%脫脂牛奶，全部用PBS稀釋...
封閉是Western Blot 至關(guān)重要的一部分， 所以正確的封閉液選擇可以讓抗體更特異地和抗原結(jié)合，為成功的WB奠定基礎(chǔ)。雖然這個(gè)步驟操作簡(jiǎn)單，但是封閉液的選擇確是很多科研人員的難題。為了讓大家更方便的選擇適合自己實(shí)驗(yàn)的封閉液，這里介紹6種常見(jiàn)不同的封閉液，以及它們的優(yōu)缺點(diǎn)。
封閉液的選用要求：
1、常用封閉液為脫脂牛奶（光明或伊利等）、牛血清白蛋白（BSA）、無(wú)蛋白封閉液等。
2、封閉液濃度：封閉時(shí)一般用5%脫脂牛奶，也可用1-5%BSA或1%無(wú)蛋白封閉液；配制二抗稀釋液一般為1-5%脫脂牛奶，全部用PBS稀釋。
3、封閉時(shí)間：室溫1-2h、4度過(guò)夜或37度半小時(shí)。
4、封閉液pH：一般5%脫脂牛奶pH大約為6.0-6.5左右，而1%脫脂牛奶可能6.5-7，好像RD公司的WB-Protocol中要求封閉液和稀釋抗體的封閉液需要調(diào)pH至7.4；但是大多數(shù)抗體不調(diào)pH也可以做出來(lái)。
5、個(gè)人經(jīng)驗(yàn)：5%脫脂牛奶封閉效果佳，但有時(shí)也可能封閉過(guò)度，可以與BSA或無(wú)蛋白封閉液輪流更換。