人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白ELISA試劑盒操作流程
人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白ELISA試劑盒操作流程:
1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
2、酶標板置4℃,包被過夜。
3、洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
5、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
6、洗板,同(4)。
7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
9、洗板,同(4)。
10、每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
12、分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
Sodium phytate;植酸鈉ZFX (L28B6) Mouse mAb100 ul
Lauric acid;正十二烷酸/月桂酸SPARC Antibody100 ul
Vinblastine Sulfate;硫酸長春堿Bub1b (D32E8) Rabbit mAb100 ul
Oxalic acid/Ethanedioic acid;無水草酸LIN28B Antibody (Mouse Preferred)100 ul
Telmisartan;替米沙坦FoxM1 (D3F2B) Rabbit mAb (Flow Formulated)400 ul