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PCR反應(yīng)基本步驟

日期:2025-01-08 02:17
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摘要: PCR反應(yīng)基本步驟: 變性:根據(jù)DNA高溫變性的原理,將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s] 退火:將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),是PCR引物與PCR模板3’端雜交,稱為退火。[55~65℃,30s] 延伸:將反應(yīng)體系溫度升至延伸溫度(約72℃),DNA聚合酶按照堿基配對(duì)原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補(bǔ)鏈,使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍。[72℃,30~60s]

PCR反應(yīng)基本步驟:


變性:根據(jù)DNA高溫變性的原理,將反應(yīng)體系溫度升至變性溫度(高于模板熔點(diǎn),約95℃),使目的DNA雙鏈裂解成PCR模板(單鏈)。[95℃,30s]


退火:將反應(yīng)體系溫度驟降至退火溫度(低于引物熔點(diǎn)約55℃),是PCR引物與PCR模板3’端雜交,稱為退火。[55~65℃,30s]


延伸:將反應(yīng)體系溫度升至延伸溫度(約72℃),DNA聚合酶按照堿基配對(duì)原則在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互補(bǔ)鏈,使目的DNA拷貝數(shù)增加1倍。[72℃,30~60s]