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分光光度法的作用及定量測定方法

日期:2025-01-08 18:47
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摘要:
    分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析的方法。它具有靈敏度高、操作簡便、快速等優(yōu)點(diǎn),是生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中*常用的實(shí)驗(yàn)方法。許多物質(zhì)的測定都采用分光光度法。在分光光度計中,將不同波長的光連續(xù)地照射到一定濃度的樣品溶液時,便可得到與不同波長相對應(yīng)的吸收強(qiáng)度。

利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量測定,主要有以下幾種方法:

1、標(biāo)準(zhǔn)管法

    將待測溶液與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液在相同條件下分別測定A值,然后按下式求得待測溶液中物質(zhì)的含量。

    CT=(AT/AS)*CS

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法

     先配制一系列濃度由小到大的標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別測定出它們的A值,以A值為橫坐標(biāo),濃度為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線(A~c工作曲線),可以求出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。在測定待測溶液時,操作條件應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時相同,以待測液的A值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出(得到)該樣品的相應(yīng)濃度。

3、吸光系數(shù)法

    當(dāng)某物質(zhì)溶液的濃度為1mol/L,厚度為1cm時,溶液對某波長的吸光度稱為該物質(zhì)的摩爾吸光系數(shù),以ε表示。ε值可通過實(shí)驗(yàn)測得,也可由手冊中查出。例如亞鐵氮二雜菲配合物的ε值 等于11000 L/cm·mol

    已知某物質(zhì)ε值,只要測出其A值再根據(jù)下式便可求得樣品的濃度:c=A/ε。