常見(jiàn)的染色方法包括簡(jiǎn)單染色、負(fù)染色、革蘭氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、莢膜染色、死活染色。制備xi菌染色片一般要經(jīng)過(guò)涂片、固定、染色、水洗、干燥等步驟，然后用顯微鏡甚至油鏡觀察。

簡(jiǎn)單染色：

不同xi菌或者由于觀察者所側(cè)重觀察的內(nèi)容不同，所以使用的染料也有差異，但是簡(jiǎn)單染色的方法是一樣的。先按照上述的制片方法制片，制成需要觀察的玻片后，使用相對(duì)應(yīng)的染料滴加到玻片上的菌膜區(qū)域，以覆蓋菌膜為準(zhǔn)。按照不同染料的要求，結(jié)合所觀察的內(nèi)容確定染色時(shí)間，染色時(shí)間到達(dá)時(shí)，進(jìn)行水洗，干燥等步驟。*后得到的玻片加蓋蓋玻片即可進(jìn)行鏡檢。

負(fù)染色：

將微生物與苯胺黑或者india墨水混合，再將混合物覆蓋于載玻片表面，由于這兩種天然黑色染料不能滲入微生物細(xì)胞，所以使得透明的微生物個(gè)體在黑色的背景下很容易觀察。

負(fù)染色法常見(jiàn)有兩種操作方法。**種發(fā)個(gè)方法比較常見(jiàn)，在一個(gè)載玻片上將微生物與異地苯胺黑混合，用另外的載玻片將混合物均勻的覆蓋于原來(lái)的載玻片上。該方法的目的是使混合物在在玻片上一邊厚一邊薄，在厚與薄中間的額區(qū)域就是觀察區(qū)域。如圖所示：

第2種方法是用一接種環(huán)苯胺黑與微生物混合，用接種針在載玻片的中央將混合物延伸很小的區(qū)域。具體操作如圖所示：

革蘭氏染色：

革蘭氏染色是xi菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。xi菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，而后經(jīng)碘液進(jìn)行媒染，之后用酒精脫色，在一定條件下有的xi菌媒染后的顏色不會(huì)脫去，有的可以被脫去，前者叫做革蘭氏陽(yáng)性菌，后者為革蘭氏陰性菌。為方便進(jìn)一步觀察，脫色后再用堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染，陽(yáng)性菌仍為紫色，陰性菌染成紅色，這就是革蘭氏染色的原理。其步驟包括初染、媒染、脫色、復(fù)染四個(gè)步驟，主要步驟如圖所示：

芽孢染色法：

部分xi菌能產(chǎn)生內(nèi)孢子，這些孢子能抵制xi菌染色液的進(jìn)入，在革蘭氏染色法涂片染色時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性菌的芽孢呈現(xiàn)無(wú)色。雖然芽孢在革蘭氏染色片中可以看到，但在不易清晰觀察時(shí)，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢與菌體呈現(xiàn)不同顏色，便于觀察。主要的芽孢染色法有孔雀綠染色法和石碳酸復(fù)紅染色法。

鞭毛染色法：

鞭毛是xi菌的運(yùn)動(dòng)器官，非常纖細(xì)，超出了光學(xué)顯微鏡觀察限度，因此通常情況下在顯微鏡下觀察不到。通過(guò)特殊的染色技術(shù)，可以將染色液附加到鞭毛的周圍，增加它的直徑，從而能在光學(xué)顯微鏡下觀察到鞭毛。鞭毛染色一般分銀鹽法和復(fù)紅沉淀法兩種。這里介紹一下銀鹽沉淀法。

莢膜染色：

一般xi菌的莢膜與染色劑的親和性低，但莢膜通透性高，因此染料可以透過(guò)莢膜使菌體著色。一般采用負(fù)染色方法使背景和菌體之間形成一透明區(qū)，將菌體襯托出來(lái)便于觀察分辨。

死活染色：

死活染色排除法是生物研究中判斷細(xì)胞活性的一種常用方法，是利用死活細(xì)胞在生理機(jī)能和性質(zhì)上的差異來(lái)進(jìn)行的，常用的染色劑有臺(tái)盼藍(lán)和美藍(lán)，前者使用范圍較廣，后者一般在酵母菌細(xì)胞死活鑒定上使用較多。