商品屬性：
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貨號 |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
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A-PJ1040-1000U |
1000U |
HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油) |
儲(chǔ)存條件：
HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油)儲(chǔ)存：-20℃ 可保存 3 年。
產(chǎn)品介紹：
末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）是一種不依賴于模板的 DNA 聚 合酶，催化脫氧核苷酸結(jié)合到 DNA 分子的 3’羥基端。帶有 突出、凹陷或平滑末端的單雙鏈 DNA 分子均可作為 TdT 的 底物，加尾長度可達(dá) 5~300nt。本酶經(jīng)電子重構(gòu)架技術(shù)篩選， 使其可以在 45°C 高溫下反應(yīng)，從而避免因 DNA 二級結(jié)構(gòu)造 成的加尾效率下降。 該酶廣泛用于 DNA 的 3’末端添加同聚物、利用修飾堿 基（如 ddNTP，DIGdUTP）標(biāo)記 DNA 3’末端、TdT 介導(dǎo)的 dUTP 缺口末端標(biāo)記技術(shù)（細(xì)胞凋亡的原位檢測）等試驗(yàn)。
活性定義：37 ℃ 60 分鐘內(nèi)，催化 1nmol dNTP 加入到多聚核苷酸 3’羥基末端中所需的酶量定義為 1 個(gè)活性單位
熱失活：75°C 20min。
注意事項(xiàng)：
1、適量 EDTA 可使 Terminal Transferase 的活性喪失。
2、金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對 Terminal Transferase 活性具有抑制作用。
3、DNA 末端 mol 數(shù)的計(jì)算，長度為 100bp 的 DNA：1pmol末端 DNA=0.33ng。
HotStart RAPA3G DNA Polymerase 為第三代 DNA 聚合酶，具有 5’-3’外切酶活性，不具有 3’-5’外切酶活性，其 具有*高的雜質(zhì)耐受性（對乙醇、胍鹽、肝素具有極高的耐 受性），因此對于純度較差的 DNA 模板，該酶仍然可以獲得 理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。RAPA3G DNA 聚合酶為化學(xué)法修飾的 HotStart 版本，其在 50℃以下 100%無活性，只有 95℃條件 下加熱 5min 后才能完全恢復(fù)酶的活力。因此該系統(tǒng)可以有 效抑制非特異性 PCR 擴(kuò)增，極大的提高了 PCR 擴(kuò)增特異性 和靈敏度。該酶配有獨(dú)特的反應(yīng)緩沖液，可在寬范圍中得到 良好的擴(kuò)增結(jié)果、檢測靈敏度更高、信號更強(qiáng)。
使用說明：
1. 按照如下組分配制 50 μl PCR 反應(yīng)體系：注意：（1）在 50 μl 的 PCR 反應(yīng)體系中 HotStart RAPA3GDNA Polymerase 的用量可在 0.1-0.5 μl 進(jìn)行調(diào)整。（2）Mg2+的濃度通常在 2-4 mM 時(shí)可獲得理想的擴(kuò)增結(jié)果。
2. qPCR 擴(kuò)增程序用兩步法：
Stage 1: 95℃ 5min
Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 30s 25-40 cycles
注意：由于該酶為化學(xué)修飾的熱啟動(dòng) RAPA3G DNA 聚合酶，必須于 95℃加熱 5min 才能恢復(fù)酶的活性，該熱啟動(dòng)步驟不能縮短時(shí)間。
3. 常規(guī) PCR 三步法程序：
Stage 1: 95℃ 5min
Stage 2: 95℃ 10s
50-60℃（退火） 20s
72℃ 4kb/min 25-40 cycles
Stage 3: 72℃ 5min
注意：由于該酶為化學(xué)修飾的熱啟動(dòng) RAPA3G DNA 聚合酶，必須于 95℃加熱 5min 才能恢復(fù)酶的活性，該熱啟動(dòng)步驟不能縮短時(shí)間。
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