商品屬性：
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貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱 |
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A-PJ1025-1ml |
1ml |
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix |
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A-PJ1025-5ml |
5ml |
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix |
儲(chǔ)存條件：
RAPA3G SYBR Green qPCR Mix請(qǐng)避光置于-20℃以下可保存３年。該試劑經(jīng) 30 次凍融后性能無下降，因此不使用時(shí)請(qǐng)置于-20℃避光保存。
產(chǎn)品介紹：
本制品是采用 SYBR Green 嵌 合 熒 光 法 進(jìn) 行Real-Time PCR 的專用試劑，本 SYBR Green qPCR Mix將化學(xué)修飾的熱啟動(dòng) RAPA3G DNA 聚合酶、反應(yīng) Buffer、dNTP、SYBR Green 染料等試劑預(yù)混在一起，是一種 2×濃度的單組分預(yù)混試劑。該制品配有單獨(dú)的 ROX 內(nèi)參染料，可用于需要 ROX 進(jìn)行孔間校正的定量 PCR 儀。RAPA3G DNA 聚合酶為第三代 DNA 聚合酶，其具有*高的雜質(zhì)耐受性（對(duì)乙醇、胍鹽、肝素具有極高的耐受性），因此對(duì)于純度較差的 DNA 模板，該 Mix 仍然可以獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。RAPA3G DNA 聚合酶為化學(xué)法修飾的 HotStart版本，其在 50℃以下 100%無活性，只有 95℃條件下加熱5min 后才能完全恢復(fù)酶的活力。因此該系統(tǒng)可以有效抑制非特異性 PCR 擴(kuò)增，極大的提高了 PCR 擴(kuò)增特異性。該試劑盒獨(dú)特的反應(yīng)緩沖液，可在寬范圍中得到良好的擴(kuò)增結(jié)果、檢測靈敏度更高、信號(hào)更強(qiáng)。
操作方法：
1. 根據(jù)機(jī)型選擇步驟 A 或 B
A: 需要添加 ROX 染料進(jìn)行反應(yīng)孔間信號(hào)矯正的 Real-TimePCR 儀，包括：ABI PRISM7900HT, 7300/7500/7500 FastReal-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P(Stratagene)等。按照如下組分配制 20 μl PCR 反應(yīng)體系：終濃度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：引物用量有時(shí)可提高到 0.8 μl 以提高擴(kuò)增效率。B:無需添加 ROX 染料進(jìn)行反應(yīng)孔間信號(hào)矯正的 Real-TimePCR 儀，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)； CFX96Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene等。按照如下組分配制 20 μl PCR 反應(yīng)體系：終濃度
2×RAPA3G SYBR Green qPCR Mix 10 μl 1×
PCR Forward Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
PCR Reverse Primer(10 μM) 0.4 μl 0.2 μM
DNA 模板 0.5~2 μl
ddH2O Up to 20 μl
2. 進(jìn)行 Real-Time PCR 反應(yīng),通常采用兩步法，程序如下：
Stage 1: 95℃ 5min*
Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 20s 40 cycles
Stage 3: Dissociation analysis
注意：由于該酶為化學(xué)修飾的熱啟動(dòng) RAPA3G DNA 聚合酶，必須于 95℃加熱 5min 才能恢復(fù)酶的活性，該熱啟動(dòng)步驟不能縮短時(shí)間。
3. 反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn) Real-Time PCR 的擴(kuò)增曲線、融解曲線和標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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