商品屬性：
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貨號(hào) |
規(guī)格 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
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A-Hc2225-20 μl |
20 μl |
pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒） |
產(chǎn)品介紹：
pcDNA3.1(+) Seamless Cloning Kit（線性化質(zhì)粒）pcDNA3.1(+)載體為哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體，具有人巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平表達(dá)；新霉素抗性基因，用于選擇穩(wěn)定細(xì)胞系。本產(chǎn)品提供pcDNA3.1(+)經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，可用無(wú)縫克隆技術(shù)將單個(gè)或多個(gè)DNA片段組裝到載體上。
無(wú)縫克隆技術(shù)可在重組酶的作用下，只需一步反應(yīng)，便可將片段克隆到任何載體中的任意位置，得到重組質(zhì)粒。無(wú)縫克隆技術(shù)作為一種非常強(qiáng)大的克隆技術(shù)，具有快速、簡(jiǎn)便、高效、多片段組裝和定向克隆等特點(diǎn)，用于單個(gè) DNA 片段的克隆，多個(gè) DNA 片段組裝克隆以及多位點(diǎn)突變構(gòu)建等實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?
產(chǎn)品特點(diǎn)：
1. pcDNA3.1(+)具有人巨細(xì)胞病毒(CMV)啟動(dòng)子，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平表達(dá)。
2. pcDNA3.1(+)具有新霉素抗性基因，用于選擇穩(wěn)定細(xì)胞系。
3. pcDNA3.1(+)經(jīng)EcoRⅠ酶切后的線性化載體，省時(shí)省力。
4. 無(wú)縫克隆技術(shù)只需要簡(jiǎn)單的 PCR 擴(kuò)增就可以制備片段DNA。
5. 可以克隆長(zhǎng)片段和多片段DNA。
操作步驟：
1. pcDNA3.1(+)線性化載體使用方法：
(1) pcDNA3.1(+)線性化載體當(dāng)做克隆載體使用，可以在擴(kuò)增PCR產(chǎn)物的
上游引物 5’端添加序列：TAGGGAGACCCAAGCTGGCTAGCgccacc（gccacc為Kozak序列）
下游引物 5’端添加序列：CACTGTGCTGGATATCTGCAGAATTC
通過(guò)無(wú)縫克隆連接到pcDNA3.1(+)中。
(2) 測(cè)序引物
pcDNA3.1-F:CTAGAGAACCCACTGCTTAC
pcDNA3.1-R(BGH-R):TAGAAGGCACAGTCGAGG
(3) pcDNA3.1(+)線性化載體為 EcoRⅠ酶切后的線性化載體，圖譜及多克隆位點(diǎn)
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